Question

研究人员用图1中质粒和图2中含目的基因的片段构建重组质粒（图中标注了相关限制酶切割位点），将重组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PCR鉴定。以下叙述不正确的是

A. 构建重组质粒的过程应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶

B. 使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组

C. 含有重组质粒的大肠杆菌可以在添加氨苄青霉素的培养基上生存

D. 利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙

Answer

C

【解析】

分析题图：质粒和外源DNA分子都含有三种限制酶切点，即限制酶BamHⅠ、BclⅠ和Hind III，其中BamHⅠ切割位点在质粒的两个标记基因上均有，所以不能用该酶切割质粒。用BclⅠ和Hind III酶切质粒切成两个片段，用BclⅠ和Hind III酶能将外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通过DNA连接酶与质粒（含标记基因）连接形成的重组质粒符合要求，而另一个重组质粒无标记基因，不符合要求。导入目的基因的大肠杆菌，其重组质粒是用BclⅠ和HindIII酶切割的，其中的氨苄青霉素抗性基因已被破坏，故不能抗氨苄青霉素。

用BclⅠ和HindIII酶切质粒切成两个片段，一个含四环素抗性基因，另一个不含抗性基因；用BclⅠ和HindIII酶能将外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通过DNA连接酶与含四环素抗性基因质粒连接形成的重组质粒符合要求，而另一个重组质粒无抗性基因，不符合要求，A正确；将目的基因与质粒形成基因表达载体需要用DNA连接酶连接，B正确；由于构建重组质粒时，需用BclⅠ酶和HindⅢ 酶切质粒，质粒上氨苄青霉素抗性基因被破坏，故含有重组质粒的大肠杆菌不能在添加氨苄青霉素的培养基上生存，C错误； PCR扩增目的基因时，需要引物引导子链合成，由图中引物引导子链形成的方向可知，利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙，D正确。

故选C。