Question

以下是有关现代生物科技的两个问题，请回答:

I.下面是与动物细胞工程有关的问题，请分析回答：

（1）在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用_____处理，以使其分散成_____，制成细胞悬液。

（2）气体环埃中 CO₂ 的作用是_____。

（3）应用于核移植的供体细胞一般选用传代 10 代以内的细胞，原因是 10 代以后细胞可能发生_________。

（4）单克隆抗体与常规抗体相比，具有_____的特点。单克隆抗体的制备过程需要经过选择性培养获得杂交瘤细胞，还需进行_________和_____，经过多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

II 转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示，图中 PstI、SmaI、EcoRI，ApaI 等为限制质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下图表示四种限制酶的识别序列及酶切点。

限制酶	PstI	SmaI	EcoRI	ApaI
识别序列 及酶切位点	—CTGCA↓G— —G↑ACGTC—	—CCC↓GGG— —GGG↑CCC—	—G↓AATTC— —CTTAA↑G—	—GGGCC↓C— —C↑CCGGG—

（1）若要获得抗病基因，能否用限制酶 SmaI 对图中对应的位点进行切割？_________。要获得含抗病基因的重组质粒能否用 PstI、ApaI 限制酶切割质粒？_____。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，根据这一原理可以利用含卡那霉素的培养  基筛选已导入重组质粒的香蕉细胞。由此推断重组质粒中应含有_____基因，作为标记基因。

（3）②、③阶段是否可使用同种培养基?___________。

Answer

胰蛋白酶 单个细胞 维持培养液 pH 遗传物质的突变 特异性强，灵敏度高 克隆化培养 抗体检测 不能 不能 抗卡那霉素 不能

【解析】

1、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。
2、分析题图：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，其中SmaⅠ酶的切割位点位于抗病基因（目的基因）上；质粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位点。所以要活动重组质粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ进行切割。①→②表示脱分化过程、②→③表示再分化过程、④是新植体。

Ⅰ．（1）在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用胰蛋白酶处理，以使其分散成单个细胞，制成细胞悬液。
（2）气体环境中CO2的作用是维持培养液pH。
（3）应用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞，原因是10代以后细胞没有发生遗传物质的突变，能保持正常的二倍体核型。
（4）单克隆抗体与常规抗体相比，优点是：特异性强，灵敏度高，可大量制备。经过选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行克隆化培养和抗体检测，经多次 筛选，才能获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

Ⅱ．（1）因为限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割．要获得含抗病基因的重组质粒，也不能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割质粒，因为含有抗病基因的外源DNA分子上没有ApaⅠ限制酶切割位点。
（2）欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有抗卡那霉素基因，作为标记基因。
（3）决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要。②、③阶段培养基中生长素与细胞分裂素的比值不同，因此这两个阶段不能是用同种培养基。