Question

目前现代生物技术迅速发展井被广泛应用于医疗卫生领域，如生物制药、器官移植、基因治疗等。请回答下列问题：

⑴研究发现，人体缺乏α-抗胰蛋白酶易患肺气肿，科研人员将α-抗胰蛋白酶基因与___________等调控组件重组构建基因表达载体，然后通过___________技术，导入羊的受精卵中，成功培育出了转基因羊，其乳汁中含有人类的α-抗胰蛋白酶，可用于治疗肺气肿。

⑵机体对移植的异体细胞、组织或器官会产生免疫排斥反应，通过对患者的ES细胞进行___________，培育出人遣组织器官，进而解决免疫摔斥问題。ES细胞主要来源于早期胚胎的___________细胞或原始性腺。

⑶P53基因是人体内的一种抑癌基因，将P53基因与腺病毒拼装而成的重组病毒导入人体可用于治疗肿瘤。拼装该重组病毒所需的工具酶有_________。用上述重组病毒治疗肿瘤，二次治疗时，该重组病毒常常无法或很少能进入靶细胞，从而影响治疗效果，原因是________。

Answer

乳腺蛋白基因的启动子 显微注射 体外诱导分化 内细胞团 限制酶和DNA连接酶 该重组病毒作为抗原，刺激机体产生特异性抗体和记忆细胞，排斥和清除重组病毒

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）要使目的基因只在乳腺组织中表达，需要将目的基因（α-抗胰蛋白酶基因）与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组构建基因表达载体；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。

（2）机体对移植的异体细胞、组织或器官会产生免疫排斥反应，通过对患者的ES细胞进行体外诱导分化，可培育出人造组织器官，进行自体移植，这样可以解决免疫排斥反应。ES细胞主要来源于早期胚胎的内细胞团细胞或原始性腺。

（3）拼装该重组病毒首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA。用上述重组病毒治疗肿瘤，二次治疗时，该重组病毒常常无法或很少能进入靶细胞，从而影响治疗效果，原因是该重组病毒作为抗原，刺激机体产生特异性抗体和记忆细胞，排斥和清除重组病毒。