Question

酸奶中乳酸活菌数的含量是衡量酸奶营养价值的一个重要指标。某兴趣小组拟探究一定体积牛奶发酵液生产酸奶过程中乳酸活菌数的变化规律。如表是某兴趣小组测定的一定体积牛奶发酵液在0.5～5.0小时内发酵液中pH值和活菌数的数值，请根据实验和表格回答下列问题：

发酵时间（h）	pH	活菌数（10^7个/ml）
0.5	6.08	1.5
1.0	5.80	4.5
1.5	5.54	5.0
2.0	5.15	26
2.5	4.75	101.5
3.0	4.67	72.5
3.5	4.54	91.5
4.0	4.45	a
4.5	4.35	51
5.0	4.28	45

（1）随着发酵时间延长，单位体积活菌数发生的变化为______，原因是______。

（2）以下为某兴趣小组的实验步骤：

①配置牛奶发酵液，经巴氏消毒法消毒，加入已______的3个发酵瓶中。

②分别向3个发酵瓶中加入含适量等量的乳酸活菌的混合发酵剂。

③在41～43℃发酵，每隔半小时取样，并采用______法接种，培养后计数。

（3）请根据以上实验步骤③继续以下的操作，回答问题：

①接种前现需要制作培养基，培养基中通常含蛋白胨，蛋白胨提供的主要营养有______；培养基灭菌常采用______法。

②若在pH为4.45条件下培养一段时间，统计得到10⁶、10⁷、10⁸三个稀释度的培养基上平均菌落数依次为412个、56个、4个，则表格中的字母a代表的数值为______。

③根据实验结果分析，生产发酵时间______h后，于0～5℃冷藏营养价值较高。

Answer

先增加后减少 乳酸菌在发酵过程中产生乳酸使得pH降低，知道相对适宜乳酸菌增殖，随着pH逐渐降低，以及发酵液的消耗，数目减少 灭菌 稀释涂布平板法 C、N元素以及维生素等 高压蒸汽灭菌 56 2.5

【解析】

1．无菌技术的主要内容：

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

2、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

3、微生物的筛选常用选择培养基进行，计数可以用血细胞净释放或稀释涂布平板法。

（1）随着发酵时间延长，由于乳酸菌在发酵过程中产生乳酸使得pH降低，知道相对适宜乳酸菌增殖，随着pH逐渐降低，以及发酵液的消耗，数目减少。

（2）①配置牛奶发酵液，经巴氏消毒法消毒，加入已灭菌的3个发酵瓶中。

③分别向3个发酵瓶中加入含适量等量的乳酸活菌的混合发酵剂，在41～43℃发酵，每隔半小时取样，并采用稀释涂布平板法法接种，培养后计数。

（3）①接种前现需要制作培养基，培养基中通常含蛋白胨，蛋白胨提供的主要营养有C、N元素以及维生素等，培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法。

②由于三个平板统计得到106、107、108三个稀释度的培养基上的平均菌落数依次为412个，56个、4个，符合30～300条件的只有56，所以此估算，每毫升样品中的乳酸菌数约为5.6×108个。

③乳酸菌的存在对人体有利，据表可知，经过2.5h的发酵后，发酵液中活菌数最多，最适于饮用。