Question

如图甲、乙中的箭头表示三种限制酶的酶切位点，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，neo^R表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是

A. 图甲中的质粒用BamHⅠ切割后，含有4个游离的磷酸基团

B. 在构建重组质粒时，可用PstⅠ和BamHⅠ切割质粒和外源DNA

C. 同时用PstⅠ和HindⅢ酶切，加入DNA连接酶后可得到两种重组质粒

D. 导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长

Answer

C

【解析】

分析题图：质粒和外源DNA分子都含有三种限制酶切点，即限制酶BamHⅠ、PstⅠ和Hind III，其中BamHⅠ切割位点在目的基因上，所以不能用该酶切割外源DNA了。用PstⅠ和Hind III酶切质粒切成两个片段，用PstⅠ和Hind III酶能将外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通过DNA连接酶与质粒连接形成的重组质粒符合要求，而另一个重组质粒无目的基因，不符合要求，导入目的基因的大肠杆菌，其重组质粒是用PstⅠ和Hind III酶切割的，其中的Ampr（氨苄青霉素抗性基因）已被破坏，不能抗氨苄青霉素。

质粒用BamHⅠ切割后将产生一个切口，打开了2个磷酸二酯键，产生2个游离的磷酸基团，故A错误；由于目的基因中含有一个BamHⅠ的识别位点，若用BamHⅠ切割将破坏目的基因的结构，故B错误；目的基因两侧分别有PstⅠ和HindⅢ的识别位点，且质粒也含有二者的识别位点，同时用这两种酶切割时，目的基因与质粒之间有一种符合要求的连接方式和一种不符合要求的连接方式，故C正确；PstⅠ的识别位点位于氨苄青霉素抗性基因中，用PstⅠ切割后，导致该抗性基因被破坏，从而造成导入目的基因的大肠杆菌不具有抗氨苄青霉素的特性，故D错误，故选C。