Question

Ⅰ:狂犬病是由狂犬病病毒引起的人畜共患的烈性传染病，制备鼠源性抗狂犬病病毒单克隆抗体是检测狂犬病病毒、治疗狂犬病的有效措施之一。请回答下列问题：

（1）用狂犬病病毒的RRIG蛋白免疫小鼠，一段时间后，若小鼠血清中检出_________的抗体，则说明小鼠产生了免疫反应。再从小鼠脾细胞中获取______，然后将其一与骨髓瘤细胞融合。

（2）在细胞融合完成后，筛选出杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的特点是_____

Ⅱ:转基因抗病甜椒的培育过程如图所示。质粒上有Pst I、Sina I、EcoR I、 Apa I等四种限制酶切割位点。请回答：

（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶_________，对含抗病基因的DNA、质粒进行切割。

（2）通常采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，受体应选_____（填“正常叶”或“损伤叶”)，原因是 ____________。 

（3）培养基中的卡那霉素会抑制甜椒愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选己导入抗病基因的甜椒细胞，应使A中含有________，作为标记基因。

Answer

抗RRIG蛋白 B淋巴细胞 无限增殖且能产生专一性抗体 PstⅠ、EcoRⅠ 损伤叶 植物受到损伤时伤口处细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞 抗卡那霉素基因

【解析】

1.基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

2.农杆菌转化法的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。

Ⅰ. （1）用狂犬病毒的RRIG蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，若在血清中产生相应的抗体，则可从小鼠的脾脏细胞中得到产生该抗体的B淋巴细胞。

（2）B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，再用特定的选择培养基进行筛选，在培养基上未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡。只有融合的细胞才能生长，这种杂交瘤细胞的特点是既能无限增殖，又能产生专一的抗体。

（3）单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高，并可大量制备。

Ⅱ．（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，但限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，要获得含抗病基因的重组质粒，应选用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶对含抗病基因的DNA、质粒进行切割。

（2）通常采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，受体应选损伤叶，这是因为植物受到损伤时伤口处细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，增大导入成功率。

（3）欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的甜椒细胞，重组质粒中应同时含有抗卡那霉素基因，作为标记基因。