Question

请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答下列问题：

（1）将实验流程按先后顺序补充完整：_______________、_______________。

（2）凝胶色谱法的基本原理是根据_______________________分离蛋白质。

（3）洗涤红细胞的目的是去除______________,洗涤干净的标志是_____________________。为防止血液凝固，在采血容器中通常要预先加入____________（抗凝剂）。

（4）下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入过程的示意图,正确的加样顺序是________。

（5）在装填色谱柱时不能有气泡存在，因为_________________________________________，降低分离效果。如果______________________________，说明色谱柱制作成功。

Answer

血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的装填 相对分子质量的大小 杂蛋白（或血浆蛋白） 离心后的上清液不再呈现黄色 柠檬酸钠 ④①②③ 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序 红色区带均匀一致地移动

【解析】

本题以图文结合为情境，考查学生对血红蛋白的提取和分离的相关知识的识记和理解能力，以及识图分析能力。

(1) 血红蛋白的提取和分离流程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析→凝胶色谱柱的制作→凝胶色谱柱的装填→样品的加入和洗脱。可见，A表示血红蛋白的释放，B表示凝胶色谱柱的装填。

(2) 凝胶色谱法的基本原理是：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。

(3) 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。洗涤干净的标志是离心后的上清液不再呈现黄色。为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，其比例是每100 mL血液加入3.0 g柠檬酸钠。

(4) 加样顺序是调整缓冲液面、滴加透析样品、样品渗入凝胶床、再调整缓冲液面，即④①②③。

(5) 由于气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，所以在装填凝胶色谱柱时，不得有气泡产生。在蛋白质分离过程中，如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。