Question

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及切割位点

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选__________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于_____态的大肠杆菌．

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加___平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中___．

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 _______，对于该部位，这两种酶 ______（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开．

（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得______种大小不同的DNA片段．

Answer

BclⅠ和HindⅢ 感受 四环素 引物甲和引物丙 TGATCC或 GGATCA ACTAGG  CCTAGT 都不能 7

【解析】

本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，旨在考查考生信息获取的能力与知识的迁移运用能力。

（1）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ会破坏标记基因，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割；酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒，为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌；
（2）由于构建重组质粒时，氨苄青霉素抗性基因被破坏，而四环素抗性基因没有被破坏，故为筛选出转入重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素；PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙；
（3）根据BamHⅠ和BclI的酶切位点，若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，则连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，由于与两种酶的酶切位点均不同，故这两种酶都不能切开；

（4）根据BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。