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WWP2基因在肿瘤细胞中高度表达,WWP2蛋白参与肿瘤细胞的生长、存活和转移等。...

WWP2基因在肿瘤细胞中高度表达,WWP2蛋白参与肿瘤细胞的生长、存活和转移等。为获得较多WWP2蛋白,利用基因工程技术设计引物,其中正向引物5′含有 EcoRI酶切位点,反向引物5′含有XhoI酶切位点。将WWP2基因与相应载体构建重组质粒导入人胚肾细胞。回答下列问题:

(1)利用上述的引物,以肺癌细胞的cDNA为模板,通过___________扩增___________的编码序列,获得需要的目的基因片段。

(2)把获得的目的基因片段和相应载体,都用___________进行酶切,分别在5′端与3′端形成___________,避免自身环化。然后利用___________将目的基因片段和相应载体连接,得到重组质粒。

(3)先将重组质粒导入经___________处理过的大肠杆菌细胞,培养后从中分离得到较多的重组质粒。

(4)培养人胚肾细胞时,先用___________使人胚肾细胞分散成单个细胞,用含有___________的合成培养液培养,并将培养瓶置于体积分数为5%的___________与空气混合气体的培养箱中培养。

(5)将重组质粒导入人胚肾细胞中,48小时后提取蛋白质并检测到WWP2蛋白,说明___________

(6)致癌因子会损伤肺泡细胞中的___________,使原癌基因和抑癌基因发生突变。研究WWP2蛋白的表达,为肺癌治疗新靶点奠定了基础。

 

PCR技术 WWP2基因 EcoRI酶和 Xhol酶 不同的黏性末端 DNA连接酶 Ca2+ 胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 动物血清(血浆) CO2 (重组质粒中的)目的基因(或WWP2基因)在人胚肾细胞中能够正常表达 DNA分子 【解析】 基因工程技术的基本步骤: (1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 (2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 (3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 (4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术.个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 (1)获取目的基因可以采用PCR扩增技术,PCR扩增过程中需要引物与模板结合,因此以肺癌细胞的cDNA为模板与题干中的因为结合,然后扩增WWP2基因,获得需要的目的基因片段。 (2)根据题意,目的基因的两端分别有EcoRI酶切位点和XhoI酶切位点,故同时用EcoRI酶和 Xhol酶对目的基因片段和相应载体进行酶切,分别在5′端与3′端形成不同的黏性末端,可以避免自身环化。然后利用DNA连接酶将目的基因片段和相应载体连接,得到重组质粒。 (3)大肠杆菌细胞需要用一定浓度的Ca2+溶液处理,使之处于感受态易于吸收重组质粒,重组质粒导入大肠杆菌后经过培养进行增殖,以便获得较多的重组质粒。 (4)进行人胚肾细胞培养时,先用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶进行处理,使之分散成单个细胞,动物细胞培养过程中一般需要在合成培养基中添加动物血清或血浆,培养过程中需要的气体环境是5%二氧化碳和95%的空气混合培养,二氧化碳的作用是维持培养液的pH值。 (5)将重组质粒导入人胚肾细胞中,48小时后提取蛋白质并检测到WWP2蛋白,说明目的基因在人胚肾细胞中得到表达,合成了相应的蛋白质。 (6)细胞癌变的原因是由于致癌因子的作用,使得细胞内的DNA分子损伤,导致原癌基因和抑癌基因发生突变引起的。
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图为果酒与果醋发酵装置示意图,请据图回答:

(1)酿造葡萄酒时,在葡萄榨汁前,葡萄要先进行___________再除去枝梗,可以避免除去枝梗时引起葡萄破损,增加被杂菌污染的机会。

(2)用___________对上述装置进行消毒后,再装入葡萄汁,将发酵装置放在18-23℃环境中,每天拧开气阀b多次,排出发酵过程产生大量的___________。装置中d处设计成弯曲形状的目的是___________

(3)10天之后,利用酸性条件下的___________对出料口c取样的物质进行检验,若出现___________现象,说明产生了酒精。

(4)产生酒精后,若在发酵液中加入醋酸菌,然后将装置放在___________环境中,适时打开___________向发酵液中充气。两次发酵过程中先不充气,一段时间后再充气的原因是___________

(5)果汁生产使用___________可以分解___________及胞间层,可以提高果汁的出汁率且果汁变得更澄清。

 

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实施乡村振兴战略是建设美丽中国的关键我国是世界第一的鹅养殖大国,约占世界出栏量的90%,快速识别刚孵化的雏鹅性别,对规模化养殖至关重要。某白鹅品种甲刚孵化出来的雏鹅绒羽通常呈黄色或浅褐色,饲养9个月后,雏鹅性成熟,绒羽退尽,换上新羽,羽色都是白色。科学家在繁育过程中,选择成年(10月龄)公鹅40只,母鹅200只,进行混群饲养,随机交配,孵化获得1个批次的雏鹅(G1),观察雏鹅的绒羽和性别,统计结果如下。请回答:

(1)同一只鹅的雏鹅的绒羽羽色与成体的羽色有很大差异,这说明控制羽色的基因___________,羽毛的差异是基因选择性表达的结果。

(2)据表推测,白鹅品种甲的雏鹅绒羽颜色___________为显性性状,推测绒羽颜色遗传最可能是伴性遗传的理由是___________

(3)为进一步确定白鹅品种甲的绒羽颜色的遗传方式,从该批次白鹅(G1)中选取雏期绒羽颜色为___________的公鹅和___________的母鹅进行杂交实验,通过子一代F1的绒羽色和性别进行确认,若F1___________,则说明控制绒羽色的基因只在Z染色体上,且能快速分辨雏鹅性别。

(4)若以上分析正确,第1批次(G1)的母鹅中,浅褐色绒羽的基因频率是___________,推算依据是___________

 

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“稻鱼共生系统”是种可持续的生态农业,在该生态系统中,稻花鱼以底栖动物摇蚊幼虫、农业害虫、丝状藻类、水生杂草等为食,鱼的排泄物则为水稻的生长提供了肥料。回答下列问题:

(1)调查该稻田水生杂草的物种丰富度的方法是___________

(2)在该生态系统的结构中,稻花鱼占有2个营养级,分别是___________;稻花鱼的存在,能够加快生态系统的___________,提高生态系统的___________稳定性。

(3)从能量流动的角度分析,稻田养鱼的意义是:能实现对能量的多级利用,从而大大提高___________;从减少环境污染的角度分析,稻田养鱼的意义是___________

 

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胰腺是哺乳动物重要器官,科学家用胰腺进行科学实验,探究其重要功能。请回答:

(1)斯他林和贝利斯剪取狗小肠并刮下黏膜,将黏膜与稀盐酸混合加砂子磨碎,制成提取液,发现提取液可促进胰腺分泌胰液。该实验验证的假设是___________

(2)胰腺中大部分是胰腺细胞,其间散布着胰岛,胰岛A细胞和胰岛B细胞分布其中,其分布方式为___________(填“胰岛A细胞、胰岛B细胞分别集群形成胰岛”/“胰岛A细胞、胰岛B细胞及其他细胞混合集群形成胰岛”)。

(3)胰腺中分泌的胰高血糖素,与肝细胞膜上的受体结合后调节糖代谢过程,这反映了细胞膜具有___________的功能。人体内需要胰腺源源不断地分泌胰岛素,以维持激素含量动态平衡的原因是___________

(4)科学家在豚鼠胰腺腺泡细胞中注射3H标记的亮氨酸,并破坏了腺泡细胞中全部的高尔基体,检测放射性的聚集和转移情况。结果发现,放射性只在细胞内进行转移,但却未出现在细胞外,这表明___________

 

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某课题组研究不同浓度NaCl溶液对茄子幼苗光合作用的影响,实验结果如表所示(检测期间细胞的呼吸强度没有显著变化)。请回答:

注:气孔导度描述气孔开放程度,气孔导度越大,气孔开放程度越大。

(1)胞间CO2进入叶绿体后,与___________结合而被固定,再被还原生成有机物。

(2)净光合速率可以通过测定一定时间内___________的释放量来计算。

(3)据表中指标分析,NaCl浓度为0-15mmol·L-1,气孔导度___________,导致___________,净光合速率降低;NaCl浓度为65-165mmol·L-1,气孔导度并不是影响净光合速率降低的主要因素,依据是___________

(4)若想进一步研究不同浓度NaCl溶液对叶片光合色素的种类和含量的影响,可从各组选取等量叶片,提取并用纸层析法分离色素,观察比较各组色素带的___________(写出两点)

 

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