Question

甘蔗黄叶综合症是一种由甘蔗黄叶病毒所引起的禾本科植物病症，科学家通过甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因（简称CP蛋白基因）转化植物来获得抗病转基因新品种。

（1）首先从甘蔗黄叶综合症的病叶中提取RNA，此过程中为了防止RNA被分解，需加入______抑制剂，以提取的RNA为模板通过______获得cDNA。

（2）对获取的cDNA进行PCR扩增，在此反应体系中，除了模板DNA、dNTP外，还需加入______，获得大量的cDNA需要在4℃的低温下保存备用，原因是______。

（3）将cDNA和质粒用同一种限制酶切割，产生相同的平末端，再用______将二者进行连接（填：E•coliDNA连接酶/T₄DNA连接酶）。在培养基上接种培养大肠杆菌作为受体细胞，同时加入一定量的CaCl₂低温冷却液，目的是制备______细胞，其具有的特殊功能是______。

（4）为检测大肠杆菌是否产生CP蛋白，需要将病毒颗粒注射入兔子体内，并从血清中分离获得______作为检测剂。

Answer

RNA酶 逆转录 引物、Taq酶（热稳定DNA聚合酶） 高溫条件下，易使DNA分子中的氢键断裂，双螺旋结构打开而发生变性 T4DNA连接酶 感受态 能吸收周围环境中的DNA分子 CP蛋白抗体（黄叶病毒外壳蛋白抗体）

【解析】

通过甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因（简称CP蛋白基因）转化植物来获得抗病转基因新品种，该题运用到了基因工程的操作手段，基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程中主要的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶。PCR技术扩增目的基因时的条件有：模板DNA、dNTP、引物、Taq酶（热稳定DNA聚合酶）。

（1）RNA酶可将RNA水解，因此为了防止RNA被分解，需加入RNA酶抑制剂；以RNA为模板获得cDNA的过程称为逆转录。

（2）采用PCR技术扩增目的基因时的条件有：模板DNA、dNTP、引物、Taq酶（热稳定DNA聚合酶）；获得大量的cDNA需要在4℃的低温下保存备用，原因是高溫条件下，易使DNA分子中的氢键断裂，双螺旋结构打开而发生变性。

（3）DNA连接酶包括E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶，这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。用CaCl2处理微生物细胞可使其成为感受态细胞，其具有的特殊功能是能吸收周围环境中的DNA分子。

（4）为检测大肠杆菌是否产生CP蛋白，需要将病毒颗粒注射入兔子体内，并从血清中分离获得CP蛋白抗体（黄叶病毒外壳蛋白抗体）作为检测剂。