Question

Ⅰ 常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能利用酶A分解木糖产生酒精。请分析回答下列问题：

(1)在制备含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项需要的是________(填序号)。

①酒精灯　②接种环　③高压蒸汽灭菌锅　④培养皿

(2)将自然界收集的酵母菌菌株转接到仅以_______为碳源的培养基中，________(填“有氧”或“无氧”)条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。

(3)将搜集到的酵母菌放入培养液中扩大培养后，用稀释涂布平板法计算每克样品中的菌株数的公式为(C÷V)×M，其中C代表________________。对于需要长期保存的菌种，可以采用________的方法。

Ⅱ 大肠杆菌的纯化包括制备牛肉膏蛋白胨培养基和纯化大肠杆菌两个环节，分析回答：

(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和 _____等条件。

(2)通常，对培养获得的纯菌种还可以依据菌落的形态、大小 _________和颜色等特征对细菌进行初步初步的鉴定和分类。要进一步鉴别大肠杆菌，还要根据微生物的代谢特点，在培养基中加入____________。

(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。

Answer

①③④Ⅱ 木糖 无氧 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 甘油管藏 渗透压 隆起程度 伊红美兰 比例合适

【解析】

平板培养基配制的基本流程为：计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节pH→灭菌（将配制好的培养基转移至锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅）→倒平板（在酒精灯火焰旁进行）；根据题意，常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能利用酶A分解木糖产生酒精，若要筛选出能利用木糖发酵产生酒精的酵母，可将收集的酵母菌菌株转接到仅以木糖为碳源的培养基中，在无氧条件下进行选择培养，则能够分解木糖产生酒精的酵母菌能在该培养基上生长；微生物分离和培养时，可以根据菌落的形状、大小等菌落特征对微生物进行初步的鉴定，伊红-美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌，其原理是大肠杆菌能分解乳糖，产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，以保证样品稀释的比例适合。

Ⅰ.（1）制备含琼脂的培养基和倒平板时，需要用到高压蒸汽灭菌锅对培养基等进行灭菌，倒平板需要用到培养皿，倒平板的操作需要在酒精灯火焰旁进行，故需要的有①③④。

（2）由题意可知：自然界中某些酵母菌能利用酶A分解木糖产生酒精，而酒精是酵母菌无氧呼吸的产物，因此将自然界收集的酵母菌菌株转接到仅以木糖为碳源的培养基中，在无氧条件下培养一周后，如果有些酵母菌死亡，则说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。

（3）计算样品菌液中的菌株数时，每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表样品菌液的稀释倍数。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

Ⅱ. （1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。

（2）通常，对培养获得的纯菌种，还可以依据菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等特征对细菌进行初步的鉴定和分类。要进一步鉴别大肠杆菌，还要根据微生物的代谢特点，在培养基中加入伊红美兰。

（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的比例合适。