Question

枯草芽孢杆菌菌体可合成淀粉酶等消化酶，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，但在紫外线照射下可获得不能合成淀粉酶的突变体。研究发现紫外线处理时间过短，获得突变体不足，若紫外线处理时间过长，又会导致枯草芽孢杆菌大量死亡。为探究紫外线处理最佳时间，需测定经处理后的枯草芽孢杆菌的突变率和存活率。完成相关实验步骤：

（1）从临时保存菌种的______________培养基中挑取菌体，制成适宜浓度稀释菌液，用稀释涂布平板法或_______________________方法测定枯草芽孢杆菌的密度；

（2）将上述稀释菌液____________________________________,分别用同等强度的紫外线灯在相同条件下处理A组1分钟、B组3分钟、C组5分钟；

（3）将每组处理后的菌液稀释适宜倍数，吸取一定量的菌液涂布在_______________的选择培养基上，每组菌液需要涂布________个平板，同时另取等量相应浓度菌液涂布在相应的1个牛肉膏蛋白胨培养基上，将上述平板均放置于37℃恒温培养箱中培养48小时；

（4）计算每个平板上菌落数。牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数可用于计算_________；其与选择培养基上的菌落数的差值可用于计算____________。（选填“突变率”或“存活率”）

Answer

斜面 显微镜直接计数法 均分为3组并标记A、B、C 以淀粉为唯一碳源 3个（或2-3个） 存活率 突变率

【解析】

统计菌落数目的方法 
（1）显微镜直接计数法 
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌。 
（2）间接计数法（活菌计数法） 
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 
②操作 
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

（1）从临时保存菌种的斜面培养基中挑取菌体，制备成菌液，用稀释涂布平板法或显微镜直接计数（或抽样检测）方法测定枯草芽孢杆菌的浓度；

（2）将菌液均分为三组，（标记为A、B、C），分别用相同强度的紫外灯处理1min、3min、5min；

（3）将每组处理后的菌液稀释适宜倍数，部分涂布在1个以淀粉为唯一碳源的培养基上，等量菌液涂布在1个牛肉膏蛋白胨培养基上。37℃培养48h。

（4）计数每个平板上的菌落数。牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数可用于计算存活率，其与另一种培养基上的菌落数可用于计算突变率。