Question

随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因测序工作的完成，人类跨入了蛋白质时代。对蛋白质进行研究和应用，首先需要获得高纯度的蛋白质。请回答下列问题：

（1）蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、_____、_____和纯度鉴定。

（2）凝胶色谱法：是根据_______________的有效方法．所用凝胶的化学本质大多为____________。SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳消除了净电荷对迁移率的影响，使电泳迁移率完全取决于_____。

（3）粗分离中透析的目的是________，若要尽快达到理想的透析效果，可以_______。

（4）装填凝胶色谱柱时，凝胶必须装填紧密，原因是_____________________，色谱柱制作成功的标志是__________________。

Answer

粗分离 纯化 相对分子质量的大小分离蛋白质 多糖类化合物 分子的大小 去除相对分子质量较小的杂质 及时更换缓冲液或增加缓冲液的量 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果 红色区带均匀一致的移动

【解析】

血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。

（1）血红蛋白的提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。

（2）样品纯化是通过凝胶色谱法（分配色谱法）去掉分子量较大的杂质。凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量较大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快。

（3）血红蛋白溶液的粗分离采用的方法是透析，即将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，去掉分子量较小的杂质，原理是小分子杂质可以通过透析袋进入缓冲液中，血红蛋白分子量较大，不能通过透析袋进入缓冲溶液。若要尽快达到理想的透析效果，可以及时更换缓冲液或增加缓冲液的量。

（4）如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果，因此，装填凝胶色谱柱时，凝胶必须装填紧密。色谱柱制作成功的标志是：红色区带均匀一致的移动。