Question

从土壤中可以筛选到产生纤维素酶的菌株，经纯化培养后可作生产纤维素酶的工程菌。

回答下列问题：

(1)筛选纤维素分解菌时，常用刚果红染色法，为防止长时间培养导致某些微生物降解刚果红，加入刚果红的时机是____________________________________________________。

(2)将挑取的菌种接种在固体培养基上常用的方法有_______________________________，不同接种方法的具体操作不同，但是核心都是____________________________________。

(3)将纤维素酶分离提纯可用凝胶色谱法，操作中首先被洗脱的是分子量______(填“大”或“小”)的蛋白质。为保证酶活性，洗脱用的溶液是____________________。

(4)如果将纤维素分解菌固定化，可以提高生产效率。固定化细胞常用的方法是___________________________，通常不选用该方法固定酶分子的原因是____________。

Answer

培养微生物得到菌落后再加入刚果红 平板划线法和稀释涂布平板法 防止杂菌的污染，保证培养物的纯度 大 缓冲液 包埋法 酶分子较小，容易从包埋材料中漏出

【解析】

1.刚果红是一种染料，可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。

2.凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

3.固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间的技术。

（1）筛选纤维素分解菌时，若在一开始就加入刚果红，则长时间培养可以导致某些微生物降解刚果红，因此应在培养微生物得到菌落后再加入刚果红。

（2）微生物的接种方法常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，两种方法虽然操作不同，但在接种过程中都应该防止杂菌的污染，保证培养物的纯度，否则无法得到纯净的菌种，甚至导致所需菌种死亡。

（3）凝胶色谱法中，相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，因此操作中首先被洗脱的是分子量大的蛋白质。为保证酶活性，要有适宜的pH值，因此洗脱用的溶液是缓冲液。

（4）固定化细胞常用的是包埋法固定化，而酶分子较小，容易从包埋材料中漏出，因此酶不用包埋法，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定化。