Question

请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题：

（1）将实验流程按先后顺序补充完整：_______、_______。

（2）凝胶色谱法的基本原理是根据_______分离蛋白质。

（3）洗涤红细胞的目的是去除______,洗涤干净的标志是_____。为防止血液凝固,在采血容器中要预先加入____________。

（4）下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入过程的示意图,正确的加样顺序是_____。

（5）在装填色谱柱时不得有气泡存在,因为_____________。在凝胶色谱操作过程中,不能发生_________的情况,一旦发生这种情况,需重新装填凝胶色谱柱。如果红色区带______,说明色谱柱制作成功。

Answer

血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的装填 相对分子质量的大小 杂蛋白（或血浆蛋白） 离心后的上清液中没有黄色 柠檬酸钠 ④①②③ 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 洗脱液流干、露出凝胶颗粒 均匀一致地移动

【解析】（1）样品处理包括:红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液。凝胶色谱操作包括:凝胶色谱柱的制作、凝胶色谱柱的装填、样品的加入和洗脱。

（2）凝胶色谱法的基本原理是根据相对分子质量的大小分离蛋白质。

（3）洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步聚的分离纯化。洗涤干净的标志是离心后的上清液不再呈现黄色。为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，其比例是每100 mL血液加入3.0 g柠檬酸钠。

（4）加样顺序是调整缓冲液面、滴加透析样品、样品渗入凝胶床、再调整缓冲液面，即④①②③。

（5）在装填凝胶色谱柱时,不得有气泡产生,因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱顺序,降低分离效果。在凝胶色谱操作过程中,不能发生洗脱液流干、露出凝胶蛋白颗粒的现象。如果红色区带均匀一致地移动,说明色谱柱制作成功。