Question

硝基苯酚是工业污水中重要污染物，某同学欲从污水处理厂污泥中分离分解硝基苯酚的细菌。请回答下列有关问题：

（1）为了筛选污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配制培养基时应选择________ (硝基苯酚，硝基苯酚+牛肉膏，硝基苯酚十葡萄糖）作为唯一碳源，检测培养基灭菌是否合格的方法是_______________________________ 。

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是________ 。常用________法进行活菌计数，1g样品被稀释10⁶倍后，每个严格灭菌的培养皿中用了0.5ml稀释液，所得的菌落数分别为112、132、141、130、140，则每克样品中的菌落数为______个，但统计的菌落数往往_______（填“多于”或“少于”)稀释液中的活菌数，原因是_________________________。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。筛选出的优良菌种可以用________法长期保存。

Answer

硝基苯酚 取若干灭菌后未接种的培养基在适宜条件下培养一段时间，观察是否有菌落生长 接种环 稀释涂布平板法 2.62108 少于 当2个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 强 甘油管藏法

【解析】

1、本实验目的是分离分解硝基苯酚的细菌，因此应当配制以硝基苯酚为唯一氮源和碳源的培养基；微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布平板法和平板划线分离法；进行平板划线操作时，从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连；稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于（稀释液中的）一个活菌，由于菌落可能是由两个或多个细胞形成，所以统计的菌落数往往少于稀释液中的活菌数。

2、菌种保藏的方法：（1）斜面低温保藏法：将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种:；（2）甘油管藏法，适合长时间保藏菌种。

（1）为了筛选污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配置培养基时应选择硝基苯酚作为碳源，保证硝基苯酚是唯一碳源和氮源。检测培养基灭菌是否合格，可以取若干灭菌后未接种的培养基在适宜条件下培养一段时间，观察是否有菌落生长，若无菌落生长则是合格的。

（2）利用划线分离法纯化菌株时使用的划线工具是接种环；稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数，由于菌落可能是由两个或多个细胞形成或者操作时有些活菌在培养过程中死亡，所以统计的菌落数往往少于稀释液中的活菌数。根据题意，1g样品被稀释106倍后，每个严格灭菌的培养皿中用了0.5ml稀释液，所得的菌落数分别为112、132、141、130、140，则菌落数平均为（112+132+141+130+140）÷5=131，则每克样品中的菌落数为1÷0.5×131×106=2.62108。

（3）菌株降解硝基苯酚的能力越强，单菌落周围分解圈越大。筛选出的优良菌种可以用甘油管藏法进行长期保存。