Question

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其它脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：

（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、_________________、______________和__________________。

（2）样品处理包括红细胞的洗涤、______________、__________________和________________________四步。红细胞洗涤次数不能过少，否则________________________；离心速度_______和时间______会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。

（3）凝胶色谱柱在装填过程中，凝胶充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，在色谱柱下端的尼龙管的螺旋夹________的情况下，一次性缓慢倒入色谱柱内，可轻轻地敲动色谱柱，使凝胶装填均匀。

（4）图是样品的加入与洗脱示意图，从图中可以看出，正确的加样操作是用吸管小心将透析后的样品________________________加样，正确的操作次序是________________________。

Answer

粗分离 纯化 纯度鉴定 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液 透析 无法除去血浆蛋白 过高 过长 打开 贴着管壁 ③①④②

【解析】

血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：
（1）样品处理：①红细胞的洗涤（低速短时间离心），②血红蛋白的释放（需要加入蒸馏水和甲苯），③分离血红蛋白（中速长时间离心）．
（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析．
（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质．
（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳．

（1）血红蛋白提取和分离步骤：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．

（2）样品处理又包括红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液和透析四步．洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化，如果红细胞洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白，离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果．

（3）凝胶色谱柱的装填:装填前，凝胶用蒸馏水或洗脱液充分溶胀，配成凝胶悬浮液。然后在与色谱柱下端连接的尼龙管螺旋夹打开的情况下，将凝胶悬浮液一 次性缓慢倒入色谱柱内。装填时，要均匀，不留气泡，如果发现气泡，必须重装。 装填完后，用300 mL 20 mmol/L的磷酸 缓冲液充分洗涤平衡凝胶12小时，使其装填紧密。

（4）从图中可以看出，正确的加样操作是用吸管小心将透析后的样品贴着管壁加样，正确的加样顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，即调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质，可以得出正确的操作次序③①④②．