Question

凝胶色谱法是60年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经在生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学等领域广泛应用，不但应用于科学研究，而且已经大规模地用于工业生产。据图回答下列问题：

（1）a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是_______，原因是_________________。

（2）自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由______替代。

（3）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡的存在，原因是__________________。

（4）洗脱时对洗脱液的流速要求是___。若选用SephadexG-75,则“G”表示________；“75”表示________________________。

Answer

a a相对分子质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快 尼龙网和尼龙纱 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 保持稳定 凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围 凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5g

【解析】

题图所给是分离蛋白质的方法是根据蛋白质的相对分子质量的大小进行的分离。熟悉记忆血红蛋白提取和鉴定实验的原理、操作步骤、注意事项是答题的关键．

（1）相对分子质量大的物质，无法进入凝胶珠中的通道孔，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，因此a先从层析柱中洗脱出来．

（2）制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构由尼龙网和尼龙纱替代．

（3）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，因为气泡会扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果．

（4）洗脱时从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动，对洗脱液的流速要求是保持稳定．交联葡聚糖凝胶（Sephadex G-75）“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5克．