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下列哪种现象表示凝胶色谱柱的装填性能良好 ( ) A. 色带均匀、狭窄、平整 B...

下列哪种现象表示凝胶色谱柱的装填性能良好    (    )

A. 色带均匀、狭窄、平整 B. 色谱柱内有气泡

C. 色谱柱内有气泡 D. 色谱柱装填不均匀

 

A 【解析】 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法,相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程长,移动的速度慢,相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道,路程短,移动的速度快,因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离. 装填凝胶色谱柱时,色谱柱内不能有气泡存在,因为气泡会扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果. 色带均匀、狭窄、平整说明凝胶色谱柱装填良好,有其它情况出现必须重装,故选A.
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考点分析:
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某生物兴趣小组以α-淀粉酶为实验材料进行系列实验:一是用凝胶色谱法测定α-淀粉酶的相对分子质量,二是用包埋法固定α-淀粉酶来探究固定化酶催化效果。请回答下列问题:

(1)凝胶色谱法的原理是__________________________

(2)某人欲使用凝胶色谱法比较α-淀粉酶、唾液淀粉酶两种蛋白质的分子质量大小,请你选择需要的材料,借用下图的实验装置,帮助其设计实验步骤,并预测实验结果,得出相关结论。

实验步骤:将含有α-淀粉酶、唾液淀粉酶两种蛋白质的混合液加入装满凝胶的玻璃管上端,用_________________进行洗脱,检测其_________________________。实验结果及结论: _____________________

(3)该小组同学用琼脂作载体,用包埋法固定—淀粉酶来探究固定化酶催化效果。实验结果如下:(注:假设加入试管中的固定化淀粉酶量与普通—淀粉酶量相同)

 

1号试管

2号试管

固定化淀粉酶

 

普通—淀粉酶

 

淀粉溶液

60℃保温5分钟,取出冷却至室温,滴加碘液

现象

变蓝

不变蓝

 

 

①该实验设计体现了________原则。

②1号试管变蓝的原因是______________

 

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凝胶色谱法是60年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果,目前已经在生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学等领域广泛应用,不但应用于科学研究,而且已经大规模地用于工业生产。据图回答下列问题:

(1)a、b均为蛋白质分子,其中先从层析柱中洗脱出来的是_______,原因是_________________

(2)自己制作凝胶色谱柱时,在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由______替代。

(3)装填凝胶色谱柱时,色谱柱内不能有气泡的存在,原因是__________________

(4)洗脱时对洗脱液的流速要求是___。若选用SephadexG-75,则“G”表示________;“75”表示________________________

 

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红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳,我们可以选用猪、牛、羊或其它脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:

(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:样品处理、_________________________________________________

(2)样品处理包括红细胞的洗涤、________________________________________________________四步。红细胞洗涤次数不能过少,否则________________________;离心速度_______和时间______会使白细胞等一同沉淀,达不到分离的效果。

(3)凝胶色谱柱在装填过程中,凝胶充分溶胀后,配成凝胶悬浮液,在色谱柱下端的尼龙管的螺旋夹________的情况下,一次性缓慢倒入色谱柱内,可轻轻地敲动色谱柱,使凝胶装填均匀。

(4)图是样品的加入与洗脱示意图,从图中可以看出,正确的加样操作是用吸管小心将透析后的样品________________________加样,正确的操作次序是________________________

 

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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳在本课题中的作用是                      (    )

A. 对分离的蛋白质进一步纯化 B. 对分离的蛋白质的纯度进行鉴定

C. 检测分离的蛋白质的活性 D. 提高蛋白质的活性

 

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样品的加入和洗脱的操作不正确的是           (    )

A. 加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面

B. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端,不要破坏凝胶面

C. 加样后,打开下端出口,使样品渗入凝胶床内

D. 等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口

 

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