Question

高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图1所示。请分析回答下列问题：

（1）按功能分，Ⅰ号培养基称为______；该培养基中必须以______作为唯一碳源。对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌，目的是______。

（2）过程①②合称为______法，若该过程所得平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0.2mL，稀释倍数为10⁵时，则每毫升样品中的细菌数约为______个。

（3）在1号培养基上挑出能产生淀粉酶的嗜热菌菌落的鉴别方法是培养基上会出现以该菌的菌落为中心的______；也可将得到的菌悬液转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，看到如图2所示情况，可判断图中______的菌落含有所需菌种。

（4）将高温淀粉酶应用于生产，需要对其进行固定化处理，对酶活性影响最小的处理方法是______。

Answer

选择培养基 淀粉 防止杂菌污染（或杀死培养基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或使培养基中所有微生物永远丧失生长繁殖能力） 稀释涂布平板 2.5×107 透明圈 周围不显蓝色 物理吸附法

【解析】

接种微生物的方法主要是稀释涂布平板法和平板划线法；稀释涂布线法：逐步稀释菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养；平板划线法由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落．高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，一般压力在100KPa，温度在121℃的条件下，维持15～30分钟用于培养基的灭菌；用酒精擦拭双手是消毒的一种方法；火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环、接种针等。

（1）由图可知，Ⅰ号培养基的作用是筛选能高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，因此属于选择培养基，该培养基需要以淀粉为唯一碳源。灭菌的目的是使培养基中所有微生物永远丧失生长繁殖能力（或杀死培养基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或防止杂菌污染）。

（2）Ⅰ号培养基上菌落分布均匀，说明过程①②采用的是稀释涂布平板法。每毫升样品中的细菌数约为50÷0.2×105=2.5×107个。

（3）根据题意可知，Ⅰ号培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈可以鉴别嗜热菌菌落。淀粉与碘液反应呈蓝色，但如果淀粉分解菌产生的淀粉酶将淀粉水解后就不能呈蓝色，则会出现无色的透明圈，故图乙所示情况中无蓝色透明圈的菌落含有所需菌种。

（4）固定化酶通常用物理吸附法和化学结合法，其中对酶活性影响最小的处理方法是物理吸附法。