Question

苹果切开一段时间后会发生褐变，原因是受损细胞中的多酚类物质会在多酚氧化酶（PPO）催化下迅速氧化。研究人员试图通过RNA干扰技术，抑制PPO的合成，从而培育不会褐变的苹果。如图表示RNA干扰技术的原理。

回答下列问题

（1）RNA干扰技术需要先合成能转录出特殊双链RNA的目的基因，构建______后，通常利用______法将其导入苹果叶肉细胞并进行表达。图中Dicer酶的作用类似限制酶，其专一性体现在能______并将其切割成较小的片段，切割后一段短小RNA参与形成诱导沉默复合体，特异性地引起PPO的转录产物降解。可见，RNA干扰技术通过影响遗传信息的______过程抑制蛋白质合成。

（2）利用______技术可将成功导入目的基因的苹果叶肉细胞培育成完整植株。这一技术的原理是______。要诱导离体的叶肉细胞脱分化形成______组织，培养基中应含有______（成分）。

Answer

基因表达载体 农杆菌转化 识别双链RNA上特定的核苷酸序列 翻译 植物组织培养 植物细胞的全能性 愈伤 无机营养成分、有机营养成分、激素、琼脂等

【解析】

基因工程技术的基本步骤： 
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）由图示分析可知，RNA干扰技术需要先合成能转录出特殊双链RNA的目的基因，构建基因表达载体后，通常利用农杆菌转化法将其导入苹果叶肉细胞并进行表达。图中Dicer酶的作用类似限制酶，其专一性体现在能识别双链RNA上特定的核苷酸序列并将其切割成较小的片段，切割后一段短小RNA参与形成诱导沉默复合体，特异性地引起PPO的转录产物降解。可见，RNA干扰技术通过影响遗传信息的翻译过程抑制蛋白质合成。

（2）利用植物组织培养技术可将成功导入目的基因的苹果叶肉细胞培育成完整植株。这一技术的原理是植物细胞的全能性。要诱导离体的叶肉细胞脱分化形成愈伤组织，培养基中应含有无机营养成分、有机营养成分、激素、琼脂等。