Question

基因工程与微生物

如图1表示制备抗体的两个途径的模式图。图2是图1普通质粒的放大，其上有3种限制酶的酶切位点，复制原点是质粒复制不可或缺的序列。

（1）下列关于Y细胞的叙述，错误的是______。

A．Y细胞是杂交瘤细胞

B．既能产生单一抗体，又能在体外快速增殖

C．图1中过程①使用的是细胞融合技术

D．Y 细胞的增殖需要细胞分裂素

（2）据图1分析，下列叙述中正确的有______。（多选）

A．制备抗体2的途径中，目的基因是V1基因

B．图示获取目的基因的方法是化学方法人工合成

C．获得Y细胞的过程不需要筛选

D．抗体1和抗体2的结构不完全相同

（3）限制酶可用于基因工程中的______。（多选）

A．获取目的基因

B．重组DNA分子导入受体细胞

C．目的基因与运载体重组

D．筛选含目的基因的受体细胞

（4）据图2，综合考虑基因工程的步骤，若只能选择一种限制酶切割质粒，该限制酶应是______，写出你作出判断的理由：______。

（5）为筛选图1中的大肠杆菌，采用的培养基部分成分如表。下列叙述错误的是______。

牛肉膏	0.5g
蛋白胨	1g
NaCl	0.5g
琼脂	2g
水	200mL

A．此培养基属于固体培养基

B．筛选时需要用到氨苄青霉素和新霉素

C．配制此培养基需要高压灭菌

D．培养基配制过程中应先调pH再定容

Answer

D ABD AC PstI BamHI会破坏复制原点，导致质粒无法复制且无法筛选；EcoRI能破坏标记基因，导致后续无法筛选 D

【解析】

1、据图1分析，细胞A表示效应B细胞，细胞Y表示杂交瘤细胞，结构甲表示基因表达载体，①过程表示动物细胞融合，②过程表示杂交瘤细胞的培养，③过程表示提取信使RNA，④过程表示逆转录，⑤表示基因表达载体的构建，⑥表示导入受体细胞。

2、分析图2可知，该质粒上存在上限制酶的酶切位点，即限制酶PstI、限制酶BamHI和限制酶EcoRI，但是BamHI的识别序列位于复制原点内，一旦用其切割会破坏复制原点，导致质粒无法复制且无法筛选；EcoRI的识别位点位于标记基因内，切割后会破坏标记基因，导致后续无法筛选，因此选择限制酶PstI进行酶切不会影响载体的功能。

3、分析表格中培养基的成分可知，含有琼脂，琼脂属于凝固剂，该培养基属于固体培养基。培养基的配制流程：计算→称量→溶化→调pH→灭菌→倒平板。

培养基按功能分：

种类

制备方法

特征

用途

选择培养基

培养基中加入某种化学成分

根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率

加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌

鉴别培养基

加入某种试剂或化学药品

依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计

鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

（1）由图1可知，细胞Y表示杂交瘤细胞，但Y细胞的增殖不需要细胞分裂素。

（2）据图1分析，下列叙述中正确的有制备抗体2的途径中，目的基因是V1基因；图示获取目的基因的方法是化学方法人工合成；抗体1和抗体2的结构不完全相同。获得Y细胞的过程需要筛选。

（3）限制酶可用于基因工程中的获取目的基因、目的基因与运载体重组两个过程。

（4）切割质粒时要保证目的基因和复制原点不被破坏，因此选择限制酶PstI酶切割较为理想。据图2可知，BamHI会破坏复制原点，导致质粒无法复制且无法筛选；EcoRI能破坏标记基因，导致后续无法筛选。

（5）为筛选图1中的大肠杆菌，采用的培养基部分成分如表，根据表格结果分析，培养基配制过程中应先定容后再调pH值，即D错误。