Question

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O₂和CO₂，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：

（1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，加入柠檬酸钠的目的是_____________ 。洗涤红细胞时要用______（填溶液）反复洗涤、离心。要让红细胞破裂，释放血红蛋白时要加入_________。

（2）得到的血红蛋白溶液装入透析袋中透析，即血红蛋白的粗分离，目的是除去_______。

（3）然后通过_____（填方法）将样品进一步纯化，最后进行纯度鉴定，使用最多的是______（填方法）。

Answer

（1）防止血液凝固 生理盐水 蒸馏水和甲苯

（2）去除样品中相对分子质量较小的杂质

（3）凝胶色谱法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

【解析】

本题是对血红蛋白的提取和分离的实验的考查，回忆血红蛋白的提取和分离的实验的实验原理和操作步骤，然后结合题干信息进行解答。血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

（1）血红蛋白的提取和分离一般分为4步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。采取血液时要在采血容器中预先加入柠檬酸钠以防止血液凝固。样品处理又包括红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液和透析4步。洗涤红细胞时要用生理盐水反复洗涤、离心。要让红细胞破裂，释放血红蛋白时要加入蒸馏水和甲苯。

（2）透析即是血红蛋白的粗分离，透析的目的是除去样品中分子量较小的杂质，透析的原理是透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内。

（3）样品的纯化是通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去。使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。