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红细胞中含有大量的血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功...

红细胞中含有大量的血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2, 可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:   

(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:________________________________

(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是________

②以上所述的过程即是________  , 它包括________________、分离血红收溶液和透析。   

(3)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定。样品纯化的目的是________。   

(4)电泳法利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。

 

(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定 (2)①防止血液凝固 ②样品处理 红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 (3)通过凝胶色谱法将相对分子量大的杂蛋白除去 (4)分子的大小 【解析】 血红蛋白提取和分离的程序可分为四步,分别是:样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。在实验中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固;样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红收溶液和透析四步。样品纯化的目的是通过凝胶色谱法将相对分子量大的杂蛋白除去,进而使SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法中迁移速率只取决于分子大小。电泳法利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子的大小、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。
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考点分析:
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红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:

(1)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,加入柠檬酸钠的目的是_____________ 。洗涤红细胞时要用______(填溶液)反复洗涤、离心。要让红细胞破裂,释放血红蛋白时要加入_________

(2)得到的血红蛋白溶液装入透析袋中透析,即血红蛋白的粗分离,目的是除去_______

(3)然后通过_____(填方法)将样品进一步纯化,最后进行纯度鉴定,使用最多的是______(填方法)。

 

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相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶色谱柱中的行进过程,可表示为图中哪一个  (    )

(注:图中大圆点代表相对分子质量大的蛋白质)

A.     B.     C.     D.

 

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对凝胶电泳的相关认识错误的是(  

A. 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率只取决于分子的大小

B. 蛋白质在SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小

C. SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅用于蛋白质相对分子质量的测定,还可用于蛋白质混合组分的分离

D. 凝胶中加入SDS可以消除净电荷对迁移率的影响

 

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下列有关血红蛋白提取和分离的相关叙述中,正确的是( )

A. 透析可去除样品中分子量较小的杂质

B. 血红蛋白释放后应低速短时间离心

C. 血红蛋白释放时加入有机溶剂,其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂

D. 洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液

 

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下列对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作不正确的是(   )

A.加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐

B.让吸管管口沿管壁环绕移动,贴壁加样至色谱柱顶端,不要破坏凝胶面

C.打开下端出口,待样品完全进入凝胶层后直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱

D.待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,每5mL收集一管,连续收集流出液

 

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