血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。
(1)将实验流程补充完整:A为_____,B为____。凝胶色谱法是根据_______来分离蛋白质的有效方法。
(2)洗涤红细胞的目的是去除____,洗涤次数过少,无法除去____;离心速度过高和时间过长会使____一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志是____。释放血红蛋白的过程中起作用的是____。
(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是_______。如果红色区带____,说明色谱柱制作成功。
红细胞中含有大量的血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2, 可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:________、________、________和________。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是________。
②以上所述的过程即是________ , 它包括________、________、分离血红收溶液和透析。
(3)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定。样品纯化的目的是________。
(4)电泳法利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。
红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:
(1)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,加入柠檬酸钠的目的是_____________ 。洗涤红细胞时要用______(填溶液)反复洗涤、离心。要让红细胞破裂,释放血红蛋白时要加入_________。
(2)得到的血红蛋白溶液装入透析袋中透析,即血红蛋白的粗分离,目的是除去_______。
(3)然后通过_____(填方法)将样品进一步纯化,最后进行纯度鉴定,使用最多的是______(填方法)。
相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶色谱柱中的行进过程,可表示为图中哪一个 ( )
(注:图中大圆点代表相对分子质量大的蛋白质)
A. B. C. D.
对凝胶电泳的相关认识错误的是( )
A. 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率只取决于分子的大小
B. 蛋白质在SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小
C. SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅用于蛋白质相对分子质量的测定,还可用于蛋白质混合组分的分离
D. 凝胶中加入SDS可以消除净电荷对迁移率的影响
下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中,正确的是( )
A. 透析可去除样品中分子量较小的杂质
B. 血红蛋白释放后应低速短时间离心
C. 血红蛋白释放时加入有机溶剂,其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂
D. 洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液