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血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2或CO2的运输。请...

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

(1)将实验流程补充完整:A为_____,B为____。凝胶色谱法是根据_______来分离蛋白质的有效方法。

(2)洗涤红细胞的目的是去除____,洗涤次数过少,无法除去____;离心速度过高和时间过长会使____一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志是____。释放血红蛋白的过程中起作用的是____

(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是_______。如果红色区带____,说明色谱柱制作成功。

 

血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小 杂蛋白(血浆蛋白) 血浆蛋白 白细胞 离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯 准确模拟生物体内的生理环境,保持体外的pH和体内一致 均匀一致地移动 【解析】 试题血红蛋的提取与分离的实验步骤主要有(1)样品处理:红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析;(2)粗分离;(3)纯化:凝胶色谱柱的制作→凝胶色谱柱的装填→→样品的加入和洗脱;(4)纯度鉴定——聚丙烯酰胺胶电泳。 (1)样品处理过程为:红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析,所以A表示血红蛋白的释放,B表示样品的加入和洗脱。凝胶色谱法的原理是分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部,路程长,流动慢。所以凝胶色谱法是根据相对分子质量大小而达到蛋白质分离的有效方法。 (2)洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白,释放血红蛋白的过程是让红细胞吸水胀破。如果分层不明显,可能是洗涤次数少,无法除去血浆蛋白。此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,也得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度。重复洗涤三次,直至上清液中没有黄色,表明红细胞已洗涤干净,因为甲苯是表面活性剂的一种,可将细胞膜溶解,从而使细胞破裂。释放血红蛋白的过程中起作用的是蒸馏水和甲苯。 (3)磷酸缓冲液(PH为7.0)能够准确模拟生物体内的生理环境,保持体外的pH和体内的一致。如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确,能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀一致地移动,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离的效果不好,这与凝胶色谱柱的装填有关。
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考点分析:
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红细胞中含有大量的血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2, 可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:   

(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:________________________________

(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是________

②以上所述的过程即是________  , 它包括________________、分离血红收溶液和透析。   

(3)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定。样品纯化的目的是________。   

(4)电泳法利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。

 

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红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:

(1)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,加入柠檬酸钠的目的是_____________ 。洗涤红细胞时要用______(填溶液)反复洗涤、离心。要让红细胞破裂,释放血红蛋白时要加入_________

(2)得到的血红蛋白溶液装入透析袋中透析,即血红蛋白的粗分离,目的是除去_______

(3)然后通过_____(填方法)将样品进一步纯化,最后进行纯度鉴定,使用最多的是______(填方法)。

 

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相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶色谱柱中的行进过程,可表示为图中哪一个  (    )

(注:图中大圆点代表相对分子质量大的蛋白质)

A.     B.     C.     D.

 

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对凝胶电泳的相关认识错误的是(  

A. 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率只取决于分子的大小

B. 蛋白质在SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小

C. SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅用于蛋白质相对分子质量的测定,还可用于蛋白质混合组分的分离

D. 凝胶中加入SDS可以消除净电荷对迁移率的影响

 

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下列有关血红蛋白提取和分离的相关叙述中,正确的是( )

A. 透析可去除样品中分子量较小的杂质

B. 血红蛋白释放后应低速短时间离心

C. 血红蛋白释放时加入有机溶剂,其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂

D. 洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液

 

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