Question

现代生物技术与技术应用

已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。 疫苗的生产和抗体的制备流程如图所示。 请回答下列问题

（1）图中X的名称是_____。

（2）A基因重组载体（ 重组质粒） 在受体细胞中表达出A蛋白，该过程除证明了质粒可以作为运载体外，还证明了_____。

A、质粒能自我复制      B．质粒有一个或多个酶切点

C．质粒有标记基因       D．生物间共用相同遗传密码子

（3）A基因在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。 为防止蛋白质被降解，在实验中对选用受体细胞大肠杆菌的要求是_____（ 填文字）。

（4）在提取分离A蛋白生产过程中，要保持A蛋白的活性，需注意的事项有（ 多选）_____。

A、适宜的温度         B．添加逆转录酶

C．适宜的pH 　　    D．添加蛋白酶抑制剂

形成有效的重组质粒，选择适当的限制性内切酶很重要。 如图1示意大肠杆菌质粒的相关基因与限制酶切点；图2示意有关限制酶在DNA分子中的具体切点。

（5）要成功转入目的基因且重组效率较高，选择限制酶的方案是_____，其原因是_____。

Answer

杂交瘤细胞 D 蛋白酶缺陷型 ACD 选用BamHⅠ和EcoRⅠ两种限制酶 两种限制酶切，形成的黏性末端不同，质粒和目的基因不易重新自我结合

【解析】

由图可知：①逆转录；②目的基因的获取；③构建基因表达载体；④把目的基因导入受体细胞；⑤用A蛋白对小鼠进行免疫处理，使B细胞发生增殖分化；⑥B细胞增殖分化出浆细胞和记忆B细胞；⑦细胞融合。X杂交瘤细胞。

结合质粒和目的基因中的限制酶切点可知，不能选择EcoRV进行切割，因为其会破坏目的基因；目的基因和载体共同含有的限制酶切点只有BamHⅠ和EcoRⅠ。

（1）由以上分析可知，图中X是浆细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。

（2）一种生物的基因能在另一种生物体内表达，说明生物间共用相同的遗传密码子。故选：D。

（3）A基因在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，根据酶的专一性原理可知，在实验中要求受体细胞是蛋白酶缺陷型大肠杆菌。

（4）影响酶活性的因素有温度、pH和抑制剂等，因此在提取分离A蛋白生产过程中，要保持A蛋白的活性，需适宜的温度、适宜的pH、添加蛋白酶抑制剂（防止A蛋白被分解）。故选：ACD。

（5）图2中A基因两侧有限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ和HindⅠ的切割位点，为了防止构建基因表达载体时目的基因和质粒自身环化或反向连接，应该用两种不同的限制酶切割，又由于图1质粒上不含限制酶HindⅠ的切割位点，因此要成功转入目的基因且重组效率较高，应该选择限制酶BamHⅠ和EcoRⅠ。