Question

人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

（1）获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取__合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用 __技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。   

_______________

（2）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是__（填写字母，单选）。

A．人血细胞启动子 B．水稻胚乳细胞启动子 C．大肠杆菌启动子  D．农杆菌启动子 

（3）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是__。

（4）人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是__。

（5）为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与__的生物学功能一致。

Answer

总RNA（或mRNA） PCR B 吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化 水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工 HSA

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）为获取HSA基因，可通过反转录法，首先需采集人的血液，提取合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因．由于DNA两条链是反向平行的，复制时也是方向相反，如图2中箭头箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，则另一条引物位于另一条链的相反一端．如图所示：。

（2）启动子通常具有物种及组织特异性，故若构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是水稻胚乳细胞启动子。

（3）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化。

（4）由于大肠杆菌为原核生物，无生物膜系统，而水稻为真核生物，具有生物膜系统，故在人体合成的初始HSA多肽，与途径Ⅱ相比，选择途径I获取rHSA的优势是 水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工。

（5）为证明rHSA具有医用价值，需对基因工程的产物进行鉴定，即确认rHSA与HSA的生物学功能一致。