Question

根据基因工程的有关知识。回答下列问题。

（1）大肠杆菌质粒常作为基因工程目的基因的载体，另外，__________和动植物病毒也可作为载体，若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而常用Ca²⁺处理大肠杆菌，其目的是___________________。

（2）利用转基因技术实现胰岛素的批量生产是目前治疗糖尿病的新思路，该过程中的关键操作环节是____________________________。

（3）对于胰岛素基因的获取，途径之一是通过提取_____________细胞中的胰岛素mRNA，经过反转录过程合成目的基因，之后通过_____________技术大量扩增。

Answer

λ噬菌体的衍生物 提高受体细胞的转化率（或使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子） 基因表达载体的构建 胰岛B PCR

【解析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样，将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测是否插入目的基因可用DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA可用分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质可用抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定有：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等；据此分析。

（1）基因工程常用的运载体除了大肠杆菌质粒、动植物病毒外，还有λ噬菌体的衍生物等；未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA）的能力极弱，因此常用Ca2+处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子。

（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体。

（3） 胰岛素基因只能在胰岛B细胞中选择性表达，因此应该从胰岛B细胞提取胰岛素mRNA，经过逆转录形成胰岛素基因，再通过PCR技术大量扩增目的基因。