Question

农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。

(1)要获得该抗病基因，可采用_____、_____等方法。

(2)要使载体与该抗病基因连接，首先应使用___________进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是 （___）

(3)切割完成后，采用________酶将载体与该抗病基因连接，在构建的基因表达载体中，除含有目的基因外，还必须有________终止子和____________。

(4)再将连接得到的重组DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去_______棉花细胞，从而将目的基因导入受体细胞，要鉴定受体细胞中是否导入目的基因，可根据标记基因表达出来的性状来确定，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，再利用植物细胞具有的______性特点进行组织培养，培育出的转基因植物，要检测目的基因是否转录，检测的方法是采用_______，要检测目的基因是否表达，检测的方法采用 ____________。

Answer

从物种中分离(或从基因文库) 人工合成 限制性核酸内切酶(限制酶) A DNA连接酶 启动子 标记基因 感染 全能 分子杂交技术 抗原—抗体杂交技术

【解析】

本题考查基因工程的相关内容，要求考生掌握基因工程常用的三种工具及作用；识记基因工程的操作步骤，能结合所学的知识答题，旨在考查考生的理解能力与综合运用能力，属于考纲识记和理解层次的考查。

（1）抗病基因属于目的基因，获取目的基因的方法：从物种中分离(或从基因文库)、人工合成等；

（2）构建基因表达载体时，需先用限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子；含有相同黏性末端的DNA分子片段才能在DNA连接酶的作用下连接起来，若载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是，故选A；

（3）切割完成后，需采用DNA连接酶将载体与该抗病基因连接形成重组DNA分子；在构建的基因表达载体中，除含有目的基因外，还必须有启动子、终止子和标记基因；

（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去感染棉花细胞；根据植物细胞全能性原理，采用植物组织培养技术将受体细胞培养成转基因植株，最后筛选出抗病的棉花；培育出的转基因植物，要检测目的基因是否转录，检测的方法是采用分子杂交技术，要检测目的基因是否表达（产物是蛋白质），检测的方法采用抗原—抗体杂交技术，两者均属于分子水平的检测，检测结果是看是否有杂交带出现。