Question

国家标准规定每毫升酸奶产品中乳酸菌数量不得低于1×10⁶个。为了解某酸奶中的乳酸菌含量是否达到国家标准，某兴趣小组进行了如下实验，请回答下列问题：

（1）制备培养基：培养基的碳源为________________(填“含碳无机物”或“含碳有机物”)。检测培养基灭菌是否合格的方法是________________________________________________________。 

（2）样品稀释：先将样品稀释10倍，可用无菌移液管吸取5 mL酸奶样品加入盛有_________mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混匀。然后进行系列梯度稀释操作，得到稀释10⁵、10⁶、10⁷倍的样品。 

（3）培养与统计：吸取不同稀释度的样品各0.1 mL，分别置于不同培养皿内，加入适宜温度的溶化状态的培养基，使之混合均匀，冷却成平板。每个稀释度做3个重复。在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进行统计,结果如下：

稀释度(倍)	10^5	10^6	10^7
平板	1	2	3	1	2	3	1	2	3
平板菌落数(个)	433	422	444	78	74	82	10	6	8

为了保证结果准确，应选择上述稀释度为_____________倍的平板菌落数作为统计结果，计算出每毫升样品中乳酸菌数量为_______________个。 

（4）在培养时,需要将培养皿倒置,原因是____________。

Answer

含碳有机物 将未接种的培养基放在恒温箱培养一段时间,观察是否有菌落生长 45 106 7.8×108 ①防止冷凝水滴落到培养基上造成杂菌污染；②减少培养基水分的散失

【解析】

1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
2、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

3、菌落计数时，为保证结果准确，一般要选择平菌落数在30～300之间的平板进行计数。

（1）根据题意可知，该实验目的为了解某酸奶中的乳酸菌含量是否达标，而乳酸菌属于异养型生物，因此培养基的碳源为含碳有机物。检测培养基灭菌是否合格，可取若干灭菌后未接种的培养基（或空白平板）培养一段时间，观察是否有菌落生长。
（2）将样品稀释10倍，即酸奶样品体积：无菌水体积=1：9，即可用无菌移液管吸取5mL酸奶样品加入盛有5×9=45mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混匀。
（3）稀释涂布平板法进行计数时，应选择平板上30～300的菌落数进行计数，因此应选择上述稀释度为106倍的平板菌落数作为统计结果，计算出样品中每毫升乳酸菌数=（78+74+82）÷3÷0.1×107=7.8×108个。
（4）在培养时，需要将培养皿倒置，原因是①防止冷凝水滴落到培养基上造成杂菌污染；②减少培养基水分的散失。