Question

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_________________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________________的培养基上进行。

（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是____________。

（3）过程①可采用的操作方法是______________。

（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用___________技术。

Answer

Hind Ⅲ、BamH I 氨苄青霉素 启动子 显微注射 抗原-抗体杂交

【解析】

1、分析题图：图中质粒包括四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、启动子、复制原点，以及两个限制酶切点，并且两个限制酶切点的位置均在四环素抗性基因上；目的基因上有三个限制酶切点，与质粒对照，共有的是BamHI、HindIII。

2、图中①表示目的基因导入受体细胞，②表示通过胚胎移植的方式将早期胚胎移植到代孕母牛体内。

（1）由图中信息可知，载体上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位点，目的基因上也有它们的酶切位点，应用此2种酶切。当人乳铁蛋白基因和质粒连接成重组质粒后，tetR基因被人乳铁蛋白基因隔开，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要含氨苄青霉素的培养基上进行。

（2）能让目的基因开始表达的是启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。

（3）将目的基因导入到动物受精卵中常用显微注射法。

（4）一般检测目的基因是否表达里用抗原-抗体杂交的方法。