Question

为了调查某市自来水水源地的水质情况，某研究小组对该地自来水水样中的大肠杆菌进行了测定，请回答下列问题

(1)该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌，若划线时在培养基上共划了_____个区域，则需要5次灼烧接种环。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是____________________________。

(2)将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入__________M L稀释液，经适宜条件下培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。据此可得出每升水样中的活菌数为5.0×10⁸。该过程中还应该同时在另一平板上接种等量无菌水，该处理的目的是____________________________。

(3)菌种需临时保藏时，要先将菌种接种到试管的_______________培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃冰箱中保藏，但此方法存在的缺点是_________。

Answer

4 杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，这样可以将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面 0.1 检测培养基平板灭菌是否合格 固体斜面 保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异

【解析】

1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、划线分离操作中的有关问题：①在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。

第一次灼烧

每次划线之前灼烧

划线结束灼烧

目的

避免接种环上可能存在的微生物污染培养基

杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种

杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染或感染操作者

②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线．每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

（1）采用平板划线法纯化微生物时，每次划线之前都要灼烧接种环，划线结束后还需灼烧接种环，若划线时在培养基上共划了4个区域，则需要5次灼烧接种环；每次划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，这样可以将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

（2）在纯化菌种时，所用的培养基都需要在接种前用压蒸汽灭菌法进行灭菌；将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入XmL稀释液，经适宜条件下培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。 首先求出3个平板的平均菌落数即(51 +50+49)+3=50 ，然后利用公式(CN) xM ，即可得出每升水样中的活菌数= ( 50/X) ×1000×1000=5.0x108 ；可得出X=0.1，要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。

（3）菌种需临时保藏时，要先将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4°C冰箱中保藏。但此方法存在的缺点是保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异。