Question

西瓜花叶病毒（WMV）主要侵害西瓜、甜瓜等各种瓜类作物，造成瓜类发病或减产。科研人员利用单克隆技术制备出抗WMV的特异性单抗，并以其为核心建立能快速有效地检测WMV的方法，可用于田间西瓜花叶病毒病的诊断和检测。回答下列问题。

（1）以提纯的WMV病毒作为抗原，对小鼠进行免疫，常用化学诱导剂__________将小鼠的__________和骨髓瘤细胞进行细胞融合。

（2）可利用选择培养基对融合细胞进行初步筛选，需要淘汰的融合细胞为__________。随后将选出的细胞多倍稀释，接种在特定细胞培养板上，使这些单细胞克隆生长，最终选出能稳定分泌__________的杂交瘤细胞。

（3）将选出的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔制备单抗腹水，一段时间后收集并纯化腹水，进行抗体效价和类型的测定。也可对克隆的杂交瘤细胞进行____________，更能持久地得到单一的抗体。单抗比一般抗血清优越得多，原因是____________。

（4）抗WMV的单克隆抗体还可作为特异性探针，利用__________方法找出能与探针特异性结合的基因表达产物，进而实现从抗病性强的西瓜植株中获取抗病目的基因，该目的基因能否在其他植物体内稳定存在并遗传的关键是___________。

Answer

聚乙二醇（或PEG） 脾脏细胞（B淋巴细胞） 融合的脾细胞一脾细胞、融合的瘤细胞一瘤细胞 抗WMV单克隆抗体 传代培养（体外培养） 纯度高、灵敏度高、识别抗原部位专一 抗原一抗体杂交 目的基因是否整合到受体细胞的染色体上

【解析】

1、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

2、动物细胞培养需要满足以下条件

①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。

③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。

④气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

3、单克隆抗体的作用：①作为诊断试剂：（最广泛的用途）具有准确、高效、简易、快速的优点。

②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症，可制成“生物导弹”。

（1）以提纯的WMV病毒作为抗原，对小鼠进行免疫，常用化学诱导剂聚乙二醇将小鼠的B淋巴细胞（浆细胞）和骨髓瘤细胞进行细胞融合。

（2）可利用选择培养基对融合细胞进行初步筛选，需要淘汰的融合细胞为激活的B淋巴细胞——激活的B淋巴细胞以及骨髓瘤细胞——骨髓瘤细胞。随后将选出的细胞多倍稀释，接种在特定细胞培养板上，使这些单细胞克隆生长，最终选出能稳定分泌特定抗体（抗WMV单克隆抗体）的杂交瘤细胞。

（3）将选出的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔制备单抗腹水，一段时间后收集并纯化腹水，进行抗体效价和类型的测定。也可对克隆的杂交瘤细胞进行体外培养，更能持久地得到单一的抗体。单抗比一般抗血清优越得多，其纯度高、灵敏度高、识别抗原部位专一。

（4）抗WMV的单克隆抗体还可作为特异性探针，利用抗原一抗体杂交方法找出能与探针特异性结合的基因表达产物，进而实现从抗病性强的西瓜植株中获取抗病目的基因，该目的基因能否在其他植物体内稳定存在并遗传的关键是目的基因是否整合到受体细胞的染色体上。