Question

回答下列关于植物组织培养的问题。

（1）植物组织培养和微生物培养都会用到超净台，超净台的工作原理是：在特定的空间内，室内空气通过特殊装置___________，吹出的洁净气流可以排出工作室原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，形成__________的工作环境。在此操作过程中，同时需打开_________，持续30分钟以上。

（2）利用MS培养基配置成发芽培养基时，除了加相应量的BA溶液、NAA溶液，蔗糖外，还需要加一定量的_________，经高压蒸汽灭菌后备用。影响高压蒸汽灭菌效果的因素有温度、压力、________等因素。

（3）若使用自然生长的菊花茎段，进行菊花的组织培养，需用70%乙醇和__________对茎段进行消毒；若茎段取自经_________培养的菊花幼苗，则不需进行消毒直接插入生芽培养基进行培养。发芽培养时__________（需要/不需要）光照条件。

Answer

过滤 无菌 紫外灯 琼脂 时间（其他合理答案也得分） 5%次氯酸钠 无菌 需要

【解析】

1、植物组织培养的注意事项：

（1）接种时应注意的事项：①接种室要消毒；②无菌操作；③接种时要防止交叉污染；④接种完立刻盖好瓶口。

（2）外植体接种前，需要将接种室、接种箱灭菌和对外植体消毒的操作：

①接种前一天，将接种室的四个角落用甲醛溶液和高锰酸钾熏蒸。

②接种前1小时，在接种室内用喷雾器喷洒来苏水；桌椅也用来苏水擦拭；接种箱内用甲醛溶液和高锰酸钾熏蒸。

③将灭菌室和接种箱内用紫外灯灭菌。

④接种前，操作者用肥皂清洗双手，擦干，再用酒精棉球擦拭双手。

⑤用次氯酸钠溶液将外植体消毒。

2、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：①消毒灭菌；②一定浓度的植物激素；③适宜的温度；④充足的养料。

3、影响植物组织培养的因素：①培养基配制；②外植体选取；③激素的运用；④消毒；⑤温度、pH、光照。

4、植物组织培养中植物激素使用：物组织培养中关键性激素是生长素和细胞分裂素；同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。

5、实验室常用的消毒方法：煮沸消毒；化学药物消毒；紫外线消毒。

6、实验室常用的灭菌方法：

①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；

②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；

③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。

（1）超净台的工作原理是：在特定的空间内，室内空气通过特殊装置过滤吹出的洁净气流可以排出工作室原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，形成无菌的工作环境。在此操作过程中，同时需打开紫外灯，持续30分钟以上。

（2）利用MS培养基配置成的发芽培养基属于固体培养基，因此除了加相应量的BA溶液、NAA溶液、蔗糖外，还需要加一定量的琼脂，经高压蒸汽灭菌后备用。高压蒸汽灭菌一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。因此影响高压蒸汽灭菌效果的因素有温度、压力、时间等因素。

（3）进行菊花的组织培养，需要对外植体进行消毒处理，用70%乙醇和5%次氯酸钠对茎段进行消毒；若茎段取自经无菌培养的菊花幼苗，则不需进行消毒直接插入生芽培养基进行培养。发芽培养时需要在光照条件下培养，以便于叶绿素的合成。