Question

如图是基因文库的构建示意图。请回答下列问题。

（1）获取目的基因时，如果目的基因的_________是未知的，可以建立一个包括目的基因在内的基因文库，再从基因文库中获得目的基因。对于高等动植物复杂的染色体DNA来说，单个基因所占比例极小，将其分离出来并非易事，一般需要先对DNA进行_________。以产生足够多的数量。

（2）如图所示基因文库用克隆载体构建，载体中目的基因可通过细菌的___________完成片段的克隆。从基因文库中分离目的基因时主要利用核酸探针，核酸探针在基因工程的操作过程中还有很多方面的应用，如：检测目的基因是否导入到受体细胞，以及_________。

（3）培育转基因羊时，可利用显微注射法将基因文库中获得的目的基因导入_____（受体）细胞，再经过___________后，移植到___________的发情母畜的输卵管或子宫角。目的基因在受体细胞中的整合率不太稳定，这除了与注射的位置和时间有关外，还要考虑目的基因的构型和__________。

Answer

核苷酸序列 扩增 繁殖 ①检测目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA中；②检测目的基因是否转录出mRNA外（答对1点即可） 受精卵 胚胎体外培养 未经配种 浓度

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因−−DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA−−分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）目的基因的获取方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成法。如果目的基因的核苷酸序列未知，可以构建基因文库，从基因文库中获取目的基因。要产生足够多的DNA片段可以采取PCR扩增技术。

（2）构建基因文库的过程中，基因表达载体中目的基因可通过细菌的繁殖完成片段的克隆。核酸探针在基因工程的操作过程中可以用于目的基因的检测和鉴定，如检测目的基因是否导入到受体细胞，以及检测目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA中；检测目的基因是否转录出mRNA。

（3）将目的基因导入动物细胞时一般选择动物的受精卵细胞作为受体，再经过早期体外胚胎培养后，移植到未经配种的发情母畜的输卵管或子宫角。目的基因在受体细胞中的整合率注射的位置和时间有关，除外还要考虑目的基因的构型和浓度的影响。