Question

抗体的基因工程改造经历了最早期的人鼠嵌合单抗、人源化单抗，以及近年来的完全人源化单抗 3 个发展阶段。

鼠源单抗    人-鼠嵌合单抗    人源化单抗    完全人源化单抗

请回答：

（1）人-鼠嵌合单抗是通过从_____细胞中提取总RNA，在_____酶的作用下形成互补 DNA， 然后以此 DNA 为模板扩增得到功能性可变区基因，再与人抗体支架区基因通过_____  连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞表达产生。

（2）人源化单抗技术主要是通过基因工程的方法将鼠源抗体的_____，即互补决定区组装到人源抗体的支架区。该技术的缺点之一，在进行人源化改造之前，必须先制备出鼠源性抗某一特定抗原的_____。

（3）完全人源化单抗包括噬菌体展示库技术和转基因鼠技术。噬菌体展示抗体库技术：将人类抗体____序列用_____技术扩增出来后插入到噬菌体蛋白的编码基因中，使抗体与噬菌体外壳蛋白形成融合蛋白而被展示到噬菌体表面（可展示针对几乎所有抗原的人源性抗体）。完全人抗体的制备则是来源于转基因小鼠：主要操作是通过_____技术将小鼠自身的抗体编码基因替换为人类抗体编码基因，而小鼠免疫系统中的其他功能组件并不受影响。

Answer

杂交瘤 逆转录 DNA连接酶 识别抗原分子的特殊部分（或抗原结合位点） 单克隆抗体 基因文库 PCR 基因敲除

【解析】

1、在制备过程中需要将抗原首先注入生物体内，是其产生具有免疫能力的B淋巴细胞，再用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，并筛选出能大量增殖和产生特异性抗体的杂交瘤细胞，最后经过体外或体内培养，获取单克隆抗体。

2、蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。

（1）单抗是杂交瘤细胞合成和分泌的。生产人——鼠嵌合单抗时，可先通过从鼠的杂交瘤细胞中提取总RNA，在逆转录酶的作用下形成互补DNA，再扩增得到鼠抗体的功能性可变区基因，再与人抗体支架区基因通过DNA连接酶连接，插入适当表达载体。

（2）单抗可以识别抗原分子的特殊部位。人源化可减少鼠源抗体的免疫原性，人源化单抗技术主要是通过基因工程的方法将鼠源抗体的抗原结合位点，即互补决定区组装到人源抗体的支架区。但人源化抗体也有一些不容忽视的缺点，如存在一定的免疫原性和亲和力变低等。此外，在进行人源化改造之前，必须先制备出鼠源性抗某一特定抗原的单克隆抗体，这耗时较长且成本高。

（3）噬菌体展示抗体库技术是将噬菌体展示及抗体组合文库技术相结合，将人类抗体基因文库序列用PCR技术扩增出来后插入到噬菌体蛋白的编码基因中，使抗体与噬菌体外壳蛋白形成融合蛋白而被展示到噬菌体表面。每一个噬菌体因携带的抗体基因不同而使其表面可能展示不一样的抗体分子。因此，理论上噬菌体展示库可以展示针对几乎所有抗原的人源性抗体。通过基因敲除技术将小鼠自身的抗体编码基因替换为人类抗体编码基因，而小鼠免疫系统中的其他功能组件并不受影响。当此种转基因小鼠受到某种抗原刺激时，可直接产生和人源相同的的抗体。