Question

目前，精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精．如图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程．请据图回答：

（1）获取外源基因用到的工具酶是_____，为了提高实验成功率，通常利用_____技术获得大量标记的外源基因。

（2）外源基因能够整合到精子的_____上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的_____才能进入卵细胞中。

（3）过程②采用的是_____技术，该过程中应对已经导入外源基因的精子进行_____处理。

（4）过程③需要在_____（至少写出两点）等条件下进行．由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的_____。

（5）为了获得更多的早期胚胎，常用_____激素对供体进行处理，使其_____，从而获得更多的卵母细胞。

Answer

限制性核酸内切酶（限制酶） PCR 染色体 头部（细胞核） 体外受精 获能 无菌无毒、适宜的温度和PH、营养充足、气体环境 动物血清（或血浆） 促性腺 超数排卵

【解析】

1、分析图可知，通过转基因技术将目的基因导入到成熟精子的染色体中，再通过体外受精作用将目的基因移入到受精卵中，再通过早期胚胎培养和胚胎移植，最终获得转基因鼠。①过程是转化目的基因进入精子的染色体上，②过程是体外受精，③过程是早期胚胎培养，④过程是胚胎移植。

2、PCR技术扩增目的基因（适用于目的基因的核苷酸序列已知的情况）。PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，其原理是DNA复制，需要模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），以指数的方式扩增，即约2n，可以在短时间内大量扩增目的基因。

（1）获取目的基因时，需要限制酶切割。为了提高实验成功率，可以通过PCR扩增技术，在短时间内大量扩增目的基因。

（2）精子与卵细胞受精时，精子的头部进入卵细胞中，并释放其细胞核进入卵细胞，但细胞质未进入。为了提高转化率，必须将外源基因整合到精子的染色体中，才可以使外源基因进入受精卵中。

（3）②过程是携带外源基因的精子与卵细胞发生体外受精，形成受精卵。精子必须获能才可以与卵细胞发生受精作用。

（4）受精卵移入发育培养液中继续培养，培养液成分一般都比较复杂，除了含有各种无机盐、有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸、激素等外，还要添加动物血清（或血浆）等物质。

（5）卵母细胞的采集可以用促性腺激素作用于雌性动物，使其超数排卵，从而获取较多的卵母细胞。