Question

回答下列关于基因工程的相关问题：

(l)基因工程中限制酶的作用是____。用两种不同的限制酶分别切割目的基因的两端获得目的基因，与经过同样双酶切的运载体连接构建基因表达载体。与单一酶切相比，双酶切具有的优点是____（答出两点）。

(2)基因表达载体应该包括启动子、目的基因、标记基因和____。常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游，双启动子的作用可能是____。标记基因的作用是______________。

(3)目的基因可以在受体细胞中表达的原因是____。若要检测目的基因是否转录，可采用的分子水平的检测方法是____。

Answer

识别特定的核苷酸序列，在特定的位点切割DNA分子 防止目的基因（载体）自身连接 防止目的基因与运载体反向连接 终止子 保证目的基因的高效转录（高效表达） 鉴别受体细胞中是否含有目的基因 目的基因与受体细胞共用一套遗传密码 分子杂交

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

4、目的基因的检测与鉴定：

（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。

（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）限制酶的作用是识别特定的核苷酸序列，在特定的位点切割DNA分子；在构建基因表达载体时，为了防止目的基因和质粒的自身环化、目的基因与质粒反向连接，需要用两种不同的限制分别切割目的基因的两端和质粒，使目的基因和质粒获得不同的黏性末端。

（2）基因表达载体包括：启动子、终止子、目的基因、标记基因等；经两个启动子串联在一起的目的是保证目的基因的高效转录；标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因。

（3）所有生物都共用一套遗传密码，所以目的基因可以在受体细胞中表达；目的基因是否转录可采用的分子水平的检测方法是分子杂交技术。