Question

回答下列问题：

（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植的原因是_____________。在哺乳动物的核移植实验中，一般通过________（物理方法）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育，当胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段时，将胚胎植入同种的、生理状态相同的另一雌性（代孕）动物体内。为获得多只与该哺乳动物遗传物质相同的个体，还可使用_______技术。

（2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的转化方法导入大肠杆菌细胞：而体外重组的噬菌体DNA通常需与_______组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是_______。

（3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用_________的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加_________的抑制剂。

（4）对城市生活垃圾进行减量化、无害化和资源化处理，将生活垃圾中的有机部分、人畜粪便等转化成优质生态复合肥，是______的技术在城市生态系统中应用的具体体现。

Answer

体细胞分化程度高，不容易恢复全能性 电脉冲（或电刺激） 胚胎分割 外壳蛋白（噬菌体蛋白） 细菌 蛋白酶缺陷型 蛋白酶 物质的良性循环（物质循环利用）

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定。

2、动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎．在体外将采集到的卵母细胞培养到减数第二次分裂中期才成熟，可以通过显微操作技术去除卵母细胞的细胞核和第一极体，核移植时，对提供细胞核和细胞质的奶牛不需要进行同期发情处理，使用电脉冲等方法可以激活重组细胞使其完成细胞分裂和发育。

（1）由于体细胞分化程度高，不容易恢复全能性，因此利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植。在哺乳动物的核移植实验中，一般通过电脉冲（或电刺激）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育；当胚胎发育到桑葚胚或囊胚阶段时，将胚胎植入另一雌性（代孕）动物体内．为获得多只与该哺乳动物遗传物质相同的个体，还可使用胚胎分割技术。

（2）一个完整的噬菌体由蛋白质外壳及其中的DNA组成，因此重组的噬菌体DNA还需与蛋白质外壳组装成完整的噬菌体。病毒的宿主细胞具有特异性，其中噬菌体的宿主细胞是细菌。

（3）蛋白酶能够降解蛋白质，为了防止目的基因表达出来的蛋白质被大肠杆菌的蛋白酶降解，可以通过诱变育种的方法，让大肠杆菌发生基因突变，获得蛋白酶合成缺陷的大肠杆菌作为受体细胞，最后在纯化时，还应添加抑制蛋白酶活性的抑制剂。

（4）根据题意分析可知，对城市生活垃圾进行减量化、无害化和资源化处理，将生活垃圾中的有机部分、人畜粪便等转化成优质生态复合肥，使得废物资源化，这主要遵循了生态工程的物质循环再生的原理。