Question

环境污染物多聚联苯难以降解，受其污染的土壤中常同时存在重金属污染。研究发现联苯降解菌内的联苯水解酶是催化多聚联苯降解的关键酶。回答下列问题：

（1）为了从富含多聚联苯的环境中分离联苯降解菌，培养基中加入多聚联苯作为____________，该培养基属于____________（填“选择”或“鉴定”）培养基。用平板划线法纯化该细菌时，第1次划线及其以后划线总是从上次划线的末端开始是为了____________。

（2）为了能够反复利用联苯水解酶，可以采用____________技术，该技术的另一个优点是___________。

（3）若从联苯降解菌中分离并得到纯度较高的联苯水解酶，纯化该酶常用的方法是____________，采用该方法先分离出分子质量____________的蛋白质。

（4）下图中实线表示联苯水解酶催化的反应速度与酶浓度的关系，虚线表示在其他条件不变的情况下，底物浓度增加一倍，反应速度与酶浓度的关系，能正确表示两者关系的是____________。

Answer

（唯一）碳源 选择 将聚集的菌体逐渐稀释以便获得单个菌落 固定化酶 提高产物的纯度 凝胶色谱法 较大 B

【解析】

微生物的培养基按功能分为选择培养基和鉴别培养基；固定化酶是指用物理学或化学的方法将酶与固相载体结合在一起形成的仍具有酶活性的酶复合物，在催化反应中，它以固相状态作用于底物，反应完成后，容易与水溶性反应物和产物分离，可被反复使用；凝胶色谱法的原理：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。

（1）为了从富含多聚联苯的环境中分离联苯降解菌，应该用以多聚联苯作为唯一碳源的选择培养基；用平板划线法纯化该细菌时，在进行第二次以及其后的划线操作时要从上一次划线的末端开始划线，因为每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

（2）为了能够反复利用联苯水解酶，可以采用固定化酶技术，该技术可使酶与产物分开，因此提高了产物的纯度。

（3）纯化该酶常用的方法是凝胶色谱法，该方法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此采用该方法先分离出分子质量较大的蛋白质。

（4）根据题意分析，开始时酶不够，底物加不加倍都不能增加反应的速率；随着酶浓度增大，反应速率才有区分，故选B。