Question

存在于土壤中的脂环酸芽孢杆菌需氧，耐热，生长温度35-70℃。橙汁生产过程中若感染脂环酸芽孢杆菌，会影响橙汁的品质，导致巨大的经济损失。为优化橙汁生产的质量监控工艺，进行下述研究。

（实验一：脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定）

实验步骤：①配制K氏培养基;

②取果园土壤，制备土壤稀释液；

③将土壤稀释液接种在K氏培养基平板上，培养后获得单菌落。

④对获得的菌落进行筛选和鉴定。

（1）K氏培养基的主要成分有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等，其中能提供生长因子的成分是______________。

（2）将分离得到的可疑菌株制成菌悬液，于80℃水浴中热处理10min，再取0.1mL热处理后的菌液涂布接种到K氏培养基平板上，45℃培养48h。此操作过程的目的是_____。

A．用80℃水浴杀死杂菌和芽孢                   B．分离纯化目标菌株 

C．用80℃水浴筛选出耐热菌株                   D．给细菌补充新的营养物质

（3）用接种环将筛得的菌株插入到半固体培养基（琼脂含量3.5g/L）中（如图），45℃培养4-5天后进行观察，能够判断是脂环酸芽孢杆菌生长的试管是______。

（实验二：脂环酸芽孢杆菌控制方法的研究）

实验步骤：

①称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。

②将实验一得到的菌株原液稀释成一定浓度。

③分别取不同浓度的抑菌液和菌株稀释液，加入到K氏培养液中形成菌悬液（三种液体均为等量）。培养一段时间后，将上述菌悬液分别接种到K氏培养基平板上。   

（4）实验二中，对照组的设置应该是_________________________________。

（5）为便于检测抑菌剂的抑菌效果，宜采用哪种接种方法？为什么？_____________________________。

Answer

酵母膏、蛋白胨 BC D 等量的无菌水+等量的菌株稀释液 涂布法 因为通过计算涂布法培养得到的菌落，可以反映抑菌剂的抑菌效果

【解析】

1．培养基的概念、种类及营养构成
（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质；

（3）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

2、微生物分离和纯化的方法：
①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面；
②稀释涂布平板法：将骏业进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

（1）K氏培养基的主要成分有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等，其中能提供生长因子的成分是酵母膏、蛋白胨，而葡萄糖是为培养的微生物提供能量。

（2）80℃水浴条件下一般微生物不能存活，能存活的微生物都是耐受的了80℃高温，再取0.1mL热处理后的菌液涂布接种到K氏培养基平板上，45℃培养48h分离纯化耐热菌株，综上所述BC正确，AD错误。

故选BC。

（3）通过题干信息可知，脂环酸芽孢杆菌是需氧型微生物，故脂环酸芽孢杆菌生长的试管是D。

（4）根据单一变量原则，实验二中，对照组的设置应该是等量的无菌水+等量的菌株稀释液。

（5）因为通过计算涂布法培养得到的菌落，可以反映抑菌剂的抑菌效果，故为便于检测抑菌剂的抑菌效果，宜采用稀释涂布法。