Question

养殖贝类的一类养殖水域的要求是每100mL海水中的大肠杆菌含量应小于1.4×10¹个。某实验小组欲检测养殖贝类的海水中大肠杆菌的含量。具体实验步骤如下：

第一步：配制培养基；

第二步：制作无菌平板；

第三步：将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计并计算各组平板上菌落的平均数。

请回答下列问题：

（1）该实验设计不完善，请将实验步骤不完善处补充完整：__________。

（2）在配制培养基时，培养基中应含有大肠杆菌所需的碳源、氮源、______和______等营养物质，还需要在培养基中添加琼脂，目的是______，配制好的培养基常用的灭菌方法是______。

（3）在接种海水时，用到的工具是______（填“接种环”或“涂布器”），最后统计的大肠杆菌菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是_________________。在计算活菌数目时，除该实验中用到的方法外，还可采用的方法是______。

Answer

第二步之后应设置空白对照组和实验组，对照组接种适量无菌水，实验组接种等量海水 水 无机盐 使培养基在常规培养条件下呈固态 高压蒸汽灭菌法 涂布器 当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的只是一个菌落 显微镜直接计数法

【解析】

1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH

、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。

2、两种纯化细菌的方法的比较

优点

缺点

适用范围

平板划线分离法

可以观察菌落特征，对混合菌进行分离

不能计数

适用于好氧菌

稀释涂布平板法

可以计数，可以观察菌落特征

吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延

适用于厌氧，兼性厌氧菌

3、消毒和灭菌

消毒

灭菌

概念

使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）

使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）

常用方法

煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法

灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌

适用对象

操作空间、某些液体、双手等

接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

（1）该实验设计不完善，应在第二步之后设置空白对照组和实验组，对照组接种适量无菌水，实验组接种等量海水。

（2）在配制培养基时，微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，为使培养基在常规培养条件下呈固态，还需要在培养基中添加琼脂，配制好的培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。

（3）在接种海水时，常用稀释涂布平板法，故用到的工具是涂布器，当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的只是一个菌落，故最后统计的大肠杆菌菌落数往往比活菌的实际数目低。在计算活菌数目时，除该实验中用到的方法外，还可采用显微镜直接计数法。