Question

将葡萄球菌在含卵黄的固体培养基上培养时，葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，形成的菌落周围会出现特有的乳白色乳浊环。某兴趣小组欲通过实验室培养和计数来检测某果汁中的葡萄球菌密度。回答下列问题：

（1）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键步骤是：_________________ ，本实验中所用的培养皿__________（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中灭菌。

（2）若要检测果汁中的葡萄球菌密度，需先进行稀释操作，稀释操作中，用手指轻压移液管上的橡皮头，吸吹3次的目的是_____________________________________ ；将稀释后的样液用稀释涂布平板法接种在固体培养基上，利用这一方法进行活菌计数的原理是_____________________________________ 。

（3）将10⁴倍的稀释样液接种在固体培养基上培养一段时间后，统计三个平板上葡萄球菌菌落数分别是210、200、220。如果需要据此计算出果汁中葡萄球菌的密度，还需要知道的一个重要数据是_______________。

（4）配制分离葡萄球菌的培养基时，在培养基中加入一定量的卵黄液，卵黄液能给微生物提供________、水和无机盐等营养物质；从功能角度对培养基进行分类，该培养基属于________________ ；已知葡萄球菌耐受高浓度NaCl，为筛选出葡萄球菌，在配制培养基时的操作方法是_____________________________。

Answer

防止外来杂菌污染 可以 使菌液与水充分混合 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌 接种时所用样液的体积 碳源和氮源 鉴别培养基 加入高浓度的NaCl溶液

【解析】

1、微生物培养基的成分：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等。

2、分离微生物的方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

3、选择培养基：①利用该分离对象对某一营养物质的“嗜好”，专门在培养基中加入该营养物质，使该微生物大量增殖。这些物质主要是一些特殊的碳源、氮源，如纤维素可用来富集纤维素分解微生物，尿素可用来富集尿素分解微生物。

②利用该分离对象对某种抑制物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物质，经培养后，由于原来占优势的它种微生物的生长受到抑制，而分离对象却可趁机大量增殖，使之在数量上占优势。如筛选酵母菌和霉菌，在培养基中加入青霉素，因青霉素可抑制细菌和放线菌的细胞壁的合成，从而抑制两类微生物的生长，而酵母菌和霉菌正常生长增殖。

（1）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键步骤是防止外来杂菌污染，培养皿的灭菌方法是干热灭菌法，所以可以放入干热灭菌箱中灭菌。

（2）进行系列稀释操作时，用移液管吸取相应的菌液注入试管后，还要用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀；

稀释后的样液需用涂布平板法接种在固体培养基上，利用这一方法进行活菌计数的原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过计数菌落个数得到细菌个数。

（3）每克样品中菌株数=（C÷V）×M，现已知的数据有稀释倍数（104倍）和菌落数目（210+200+220）÷3，所以还需要知道的数据是接种时所用样液的体积。

（4）配制分离葡萄球菌的培养基时，在培养基中加入一定量的卵黄液，卵黄液除了能给微生物提供碳源和氮源、水和无机盐等营养物质外，还具有的作用是鉴别葡萄球菌，因为葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环，所以是鉴别培养基。

在配制培养基时若加入高浓度的NaCl溶液，就更容易筛选出葡萄球菌来，最可能的原因是葡萄球菌更耐受高浓度NaCl溶液。