Question

结核分枝杆菌（M.tuberculosis），是引起结核病的病原菌。建国前结核病死亡率达200-300人/10万，建国后开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，其发病率和死亡率大为降低。临床用药前，有时需要做细菌相关耐药实验。请回答下列相关问题：

（1）适于结核杆菌生长的培养基中的营养成分一般含有___________________以及水和无机盐，除了提供以上几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及___________的要求。

（2）若对结核杆菌进行分离计数，需要将含有结核杆菌的菌液采用____________法接种于经过_________灭菌后冷却的固体培养基表面，这种接种方法的好处是___________。所有操作都应在___________附近进行。

（3）将分别含等剂量不同抗生素的相同大小的小滤纸圆片均匀置于该平板上的不同位置，在适宜条件下培养一段时间，结果滤纸片周围均出现透明圈，这说明结核杆菌对实验所用抗生素表现为_____________（填“敏感”或“不敏感”）。

（4）接种卡介苗，可以降低结核病的发病率和死亡率，所用的卡介苗属于_________（填“抗原”、“抗体”）。

Answer

碳源、氮源 氧气 稀释涂布平板 高压蒸汽 可得到单个的菌落（或可将菌群分散成单个的细菌） 酒精灯火焰 敏感 抗原

【解析】

1、培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、特殊营养物质以及氧气的要求。

2、称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。

3、卡介苗是用于预防结核病的疫苗。接种卡介苗后能使机体对结核分枝杆菌产生特异性的免疫力，可阻止该病菌在人体内的繁殖、播散，可以预防结核性脑膜炎和粟粒性结核

4、微生物接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，前者只能得到单菌落用于纯化菌种，不能用于计数，而后者不仅能得到单菌落而且还可进行活菌计数。

（1）由分析可知：培养基中的营养成分应含有碳源、氮源以及水和无机盐，除提供以上几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

（2）由于稀释涂布平板法不仅能得到单菌落而且还可进行活菌计数，故要对结核杆菌进行分离计数，需采用稀释涂布平板法接种于固体培养基表面，培养基灭菌的方法通常采用高压蒸汽灭菌法，冷却后可用稀释涂布平板法将结核杆菌的菌液经梯度稀释后进行接种，这种接种方法的好处是可得到单个的菌落（或可将菌群分散成单个的细菌）。由于酒精灯火焰附近为无菌区，为了避免杂菌污染，故接种时在在酒精灯火焰附近进行。

（3）由于滤纸圆片上含有不同抗生素，将圆片置于该平板上的不同位置，在适宜条件下培养一段时间之后，在滤纸片周围均出现透明圈，说明抗生素抑制或消灭了结核杆菌，故这说明结核杆菌对实验所用抗生素表现为敏感。

（4）卡介苗是减毒的结核杆菌，能刺激机体发生特异性免疫反应，使机体产生抗体和记忆细胞，从而起到了预防感染结核杆菌的作用，可以降低结核病的发病率和死亡率，故此卡介苗属于抗原。