Question

下面几幅图与基因工程有关。图1为限制酶EcoR I的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列问题：

(l)获得图l中目的基因的方法除PCR技术外，还有____。

(2)采用PCR扩增目的基因的原理是___，图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有___两种引物(DNA复制方向由3'-5')。

(3)图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述错误的是____（填下列字母，不定项）。

a．该片段的基本骨架由脱氧核糖与磷酸交替连接而成

b．该片段含A-T碱基对比较多，故其结构比较稳定

c．若利用PCR扩增该片段，则需解旋酶将①氢键全部解开

d．若该目的基因复制6次，则需要碱基A的数量是252个

(4)在构建目的基因表达载体时，用Pst I、EcoR I两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时产生____，从图2切割下目的基因需要消耗 ____个水分子。不选用限制酶Pst I和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是_____。如果大肠杆菌是受体细胞，为使重组质粒较易导入大肠杆菌，需先用____处理大肠杆菌。

Answer

从基因文库中获取、人工合成 DNA复制 A、D bcd 目的基因与运载体反向连接 4 会破坏标记基因 氯化钙

【解析】

1、基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

2、基因工程的工具：

（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。

（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。

（1）获得图1中目的基因的方法有PCR技术、从基因文库中获取、人工合成。

（2）采用PCR扩增目的基因的原理是DNA复制，由图2可知，DNA复制只能从3’到5’，因此构建前利用PCR技术扩增基因时，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取A和D作为引物。

（3）a、DNA的基本骨架由脱氧核糖与磷酸交替连接而成，a正确；

b、其结构中G∥C碱基对越多，分子结构越稳定，c错误；

c、DNA复制时，边解旋边复制，故不会将氢键全部断裂，c错误；

d、由图3可知，目的基因碱基A有2个，复制六次需要碱基A的数量为26×2-2=126个，d错误。

故选bcd。

（4）在构建目的基因表达载体时，用PstⅠ、EcoRⅠ两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时产生目的基因与运载体反向连接。限制性核酸内切酶破坏的是磷酸二酯键，图中目的基因切割需要破坏4个磷酸二酯键，因此需要消耗4个水分子。

由图可知，不选用限制酶PstⅠ和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是会破环标记基因。如果大肠杆菌是受体细胞，为使重组质粒较易导入大肠杆菌，需先用氯化钙处理大肠杆菌。