Question

异烟肼(isoniazid)又名雷米封(rimifon)，是吡哆醇的结构类似物或代谢拮抗物。科研人员为了定向培育抗异烟肼的吡哆醇高产细菌突变株，采用梯度平板法进行了如下实验：

①在灭菌后的培养皿中加入l0mL融化的普通培养基，皿底斜放（一边垫起），待凝（如图1）；

②待培养基凝固后将培养皿放平，倒上第二层含适当浓度的异烟肼的培养基(l0mL)，这样便得到异烟肼含量从一边到另一边逐渐升高的梯度平板（如图2）；

③用移液管移取经诱变处理后的细菌细胞悬液0. 1mL到梯度平板上，进行涂布；

④将平板倒置于22℃恒温培养箱中培养一段时间，可观察到梯度平板上细菌的生长情况（如图3）。

据分析回答：

(1)从作用来看，本研究使用的培养基属于_____培养基，为了使其能够凝固，在配制时通常需要在培养基中加入____。

(2)步骤①中培养基常用的灭菌方法是_____ ，步骤③中三角刮刀常用的灭菌方法是 ___。

(3)步骤③中，滴加到梯度平板上的细菌细胞悬液一般不超过0.ImL的原因是____。

(4)根据实验结果推测，图3抗性菌落主要位于图2中_____端，其具有抗药性的来源是____。

Answer

选择 琼脂 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 培养基表面的细菌细胞悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 B 基因突变

【解析】

1、培养基按功能分：选择培养基、鉴别培养基。

2、无菌技术

（1）关键：防止外来杂菌的入侵。

（2）具体操作

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。

（1）该实验所用的培养基中含有药物，只有能抗药物的微生物才能在该培养基上生存，因此该培养基属于选择培养基；为了使培养基能够凝固，通常需要在培养基中加入凝固剂--琼脂。

（2）培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，三角刮刀常用的灭菌方法是灼烧灭菌。

（3）滴加到梯度平板上的酵母菌细胞悬液一般不超过0.1mL的原因是培养基表面的酵母菌细胞悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。

（4）根据实验结果推测，图3抗性菌落主要位于图2中B端，菌株的抗药性是经诱变处理得到的，其来源是基因突变。