Question

运用基因工程手段可在酵母菌细胞中表达出乙肝疫苗，回答下列问题：

（1）在乙肝疫苗的生产中，应该选择__________（填“抗原”或“抗体”）基因作为目的基因，该目的基因在__________催化下，利用__________技术进行扩增。

（2）乙肝疫苗的主要成份是乙型肝炎病毒HBV的包膜蛋白（糖蛋白），其编码基因位于HBV基因组的S区，S区编码三种不同的包膜蛋白，其末端有226个氨基酸序列是相同的，三种蛋白共同构成完整的乙肝疫苗颗粒，由此推测基因组的S区有三个__________和同一个__________调控组件。除上述调控组件和复制原点外，构建表达载体还需要有__________，其作用是______________________________。

（3）用基因工程生产乙肝疫苗时，若选用细菌为受体细胞，则不能得到引起免疫反应的基因表达产物，其原因是：①乙肝病毒属于动物病毒，不适合寄生于原核生物；②___________________________。

Answer

抗原 DNA聚合酶 PCR 启动子 终止子 标记基因 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来 大肠杆菌为原核生物,没有真核生物所具有的内质网、高尔基体等结构，无法对核糖体合成的肽链进行加工

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）人工免疫时需要定期注射抗原，在乙肝疫苗的生产中，应该选择抗原基因作为目的基因，对目的基因的扩增需要PCR技术，在该技术中需要热稳定DNA聚合酶。

（2）由题可知，乙肝疫苗的主要成份是乙型肝炎病毒HBV的包膜蛋白（糖蛋白），其编码基因位于HBV基因组的S区，S区编码三种不同的包膜蛋白，其末端有226个氨基酸序列是相同的，三种蛋白共同构成完整的乙肝疫苗颗粒，由此推测基因组的S区有三个启动子和同一个终止子调控组件。除上述调控组件和复制原点外，构建表达载体还需要有标记基因，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来。

（3）用基因工程生产乙肝疫苗时，若选用细菌为受体细胞，则不能得到引起免疫反应的基因表达产物，其原因是：①乙肝病毒属于动物病毒，不适合寄生于原核生物；②细菌为原核生物，没有酵母菌等真核生物所具有的内质网、高尔基体，无法对核糖体合成的肽链进行加工。