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白僵菌可感染农业害虫,因而可用来防治农业害虫。由于白僵菌对草丁膦(一种除草剂)敏...

白僵菌可感染农业害虫,因而可用来防治农业害虫。由于白僵菌对草丁膦(一种除草剂)敏感,且杀死害虫的能力较弱,科研人员将Bar基因(抗除草剂基因)和毒蛋白基因导入白僵菌进行基因工程改造,流程如图所示:

1)从苏云金芽孢杆菌中获取的毒蛋白基因,通过_________技术可在体外大量扩增。该扩增过程所需添加的酶是________

2)图中形成重组质粒1时需要的限制酶是________;形成重组质粒2除了需要限制酶Xba外,还需要_______酶。

3)将重组质粒2导入经_______处理成为感受态的白僵菌,一段时间后用含有______的培养基进行筛选,获得含有Bar基因的重组白僵菌。

4)科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,再________________,以判断重组白僵菌的杀虫效果。

 

.PCR; 热稳定DNA聚合酶(或Taq酶) NcoⅠ、BamHⅠ DNA连接 Ca2+ 草丁膦 用此叶片饲喂害虫,记录单位时间内的害虫死亡的数 【解析】 基因工程中获取目的基因的方法有多种,如果已知全部序列可以采用人工直接合成或PCR合成。在构建基因表达载体时选用的限制酶既能将目的基因切割下来也能将运载体切割,但不能将运载体上的标记基因切割。 据图分析,图中首先利用NcoI、BamHI两种限制酶切割目的基因和质粒,该过程利用两种限制酶可以防止目的基因和质粒自身连接;再用DNA连接酶形成重组质粒1;然后再利用XbaI 酶分别切割重组质粒1和Bar基因,再构建重组质粒2。 (1)毒蛋白基因是从苏云金芽孢杆菌中获取的原核基因,可以通过PCR技术进行大量扩增,该过程需要热稳定DNA聚合酶(或Taq酶)的催化。 (2)根据以上分析已知,构建重组质粒1时使用的限制酶是NcoⅠ、BamHⅠ;形成重组质粒2时,目的基因和重组质粒1被限制酶XbaⅠ切割后,还需要用DNA连接酶进行连接。 (3)白僵菌属于微生物,需要使用钙离子处理获取感受态细胞,才有利于重组质粒2的导入。Bar基因是抗除草剂基因,因此一段时间后用含有草丁膦的培养基进行筛选,获得含有Bar基因的重组白僵菌。 (4)在个体层次进行鉴定时,将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,再用此叶片饲喂害虫,记录单位时间内的害虫死亡的数,以判断重组白僵菌的杀虫效果。
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考点分析:
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今年非洲猪瘟导致大量生猪死亡,通过克隆猪来给生猪养殖户提供猪仔是一条值得探索的途径。早期胚胎细胞异常凋亡是目前克隆猪成功概率较低的主要原因,Bcl-2基因是细胞调亡抑制基因,用PCR技术可以检测该基因转录水平,进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如图。请回答下列问题

1)图中应选择减数第二次分裂中期的卵母细胞进行核移植,原因是_______________,为了保证正常的二倍体核型,使用的良种猪体细胞一般都选择__________代以内的细胞。

2)图中X过程使用的酶是_______________,用PCR扩增Bcl-2基因。该技术的前提是要有一段已知__________________。根据这一序列设计合成引物,PCR扩增过程中使用的酶是_______________

3)在PCR过程中可检测出cDNABcl-2cDNA的分子数,进而计算总mRNABcl-2的分子数,从而反映出_______________________

4)胚胎移植中,应选择有__________________的个体作为受体母猪,并对受体母猪进行______处理。

 

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如图为我国某农场的桑基鱼塘生态农业模式图,请据此图回答以下问题:

1)该图中,可以体现生态工程的基本原理主要有______

2)该图中,要想通过基因工程培养抗病桑树,用___切割含有抗虫基因的DNA分子和运载体,再用___连接,构建基因表达载体,将基因表达载体导入桑树的叶肉细胞,再通过___技术将叶肉细胞培养成植株。

3)该农场从国外引入几头良种猪,若想大量繁殖此良种猪,可采用___技术,该技术首先要对供体和受体进行___处理,然后给供体猪注射促性腺激素,使其___,从而获得更多的卵母细胞,然后培养至___期,与经过___处理的精子进行体外受精,得到早期胚胎,移植到受体猪体内。

 

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栾树适合生长于石灰石风化产生的钙基土壤中,抗恶劣环境的能力强,因此常用于矿区废弃地恢复过程中的种植。为了增加栾树的耐旱性,某科研所将耐旱基因导入栾树中,流程图如下。回答下列相关问题:

1)使用HindIIIBamHITi质粒的_____上进行切割。经过②构建的产物称为____,经过③可形成具有_____能力的薄壁细胞,进而形成甲中的_____组织。

2)③④⑤过程的基本原理是________,利用该技术可以实现快速大量繁殖优良品种的种苗,也可以获得单倍体幼苗,请说出二者在操作上的区别是____________________________

3)矿区废弃地恢复工程中,关键在于植被的恢复,以及为植被恢复所必需的_______的重建。最终为了使该地区具有较高的抵抗力稳定性,这体现了生态工程的_______原理。

 

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35%40%的甲醛水溶液(福尔马林)可作为防腐剂,其防腐的原理是使蛋白质变性。自然界中有能分解甲醛的细菌。下图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程,请分析回答下列问题:

1)②过程的目的是________,从功能上分,③属于_____培养基。

2)上述实验中,不需要进行灭菌处理的是_________

3)由③④的接种可选用平板划线法,在第二次及以后划线时,总是从上一次划线的末端开始划线的目的是_________。经过⑤过程后,取样测定甲醛浓度,选出________的培养瓶,再分离、培养菌株。

4)为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响,进行了相应实验并得到如图所示结果。由图可知,当降解时间足够,甲醛的初始浓度低于1 200 mg/L时,__________________;当甲醛的初始浓度增高至1 600 mg/L时,48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱,甚至失去降解能力,其原因可能是_____________

 

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我国生活饮用水卫生标准规定:接种1mL水样在牛肉青蛋白胨琼脂培养基上,经37℃、24h培养后,所生长出的菌落总数不得大于100。某兴趣小组对某蓄水池进行细菌总数测定,以了解池水是否符合饮用水卫生标准。回答下列问题:

1)用三角瓶取水样前,可采用_________________(填灭菌方法)对三角瓶灭菌;取水池的水龙头用酒精擦拭后,再通过___________________的方法灭菌;在微生物培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑____________和渗透压等条件。

2)该小组通过滤膜法测定细菌总数,将10mL的水样进行过滤后,将滤膜放在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上培养,培养时应将平板倒置,其目的是________________________________,经过24h培养,得到结果为:平板141个菌落、平板235个菌落、平板338个菌落,则所取水样测定结果_____________ ( “符合”或“不符合”)饮用水的标准。

3)若要鉴别水样中大肠杆菌,培养基中还应加入的非营养物是__________________,若要长时间保存大肠杆菌,可以采用________________________;使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃,以防止____________________________________

 

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