利用基因工程等生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子Ⅳ，用于血友病的治疗。请回答下列问题：
（1）目的基因的获取方法不是唯一的，若以mRNA为材料人工合成获得凝血因子Ⅳ基因。其具体方法是___________，构建的基因表达载体应该包括启动子，终止子、____________等。
（2）将含有目的基因的表达载体导人奶山羊受精卵后，需要进行鉴定和检测来确定基因的表达情况。检测奶山羊乳汁中是否含有人凝血因子Ⅳ，可采用__________法。除了分子检测外，有时还需要进行________水平的鉴定。
（3）已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。在DNA连接酶的作用下构建重组质粒，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端_________ （填“能”或“不能”）连接，理由是_____________。
（4）若最终转基因奶山羊乳汁中成功表达出人凝血因子Ⅳ，其中涉及的生物技术有___________________
科学家找到了一种基因治疗肿瘤的新疗法：将一种基因工程病毒——水疱型口炎病毒（VSV）注入肿瘤细胞，以此破坏肿瘤细胞生长。该病毒中添加了人类干扰素β基因与NIS蛋白质基因，使基因工程病毒既能准确侵染肿瘤细胞又能保护正常细胞，据此回答下列问题：
（1）基因治疗方法包括________________________________________________，无论哪种方法都_____ （填“是”或“不是”）直接对致病基因进行修饰与改造的。
（2）该水疱型口炎病毒（VSV）能破坏肿瘤生长的理论基础是_________________________________；为保证人体安全，VSV应__________________________________________________。
（3）用__________________技术可快速大量扩增人类干扰素β基因，因为该方法使目的基因数量呈___________形式增长。
（4）如果人类干扰素β基因产物既能保护正常细胞又能对抗肿瘤细胞，那么NIS基因的功能可能是 __________________________________________，该过程体现了细胞膜具有________的功能。
近日，美国和澳大利亚的研究人员发现，从锥形蜗牛体内提取出的毒液可望帮助人类开发出超级速效的胰岛素。他们研究表明锥形蜗牛毒蛋白（Con-Ins Gl）能加速受体细胞信号转换，比人类胰岛素更加快速的发挥作用。因此制造这类“速效胰岛素”以及利用转基因技术实现批量生产成为I型糖尿病治疗的新思路．请回答下列问题：
（1）利用基因工程制造Con-Ins Gl这种速效胰岛素过程中，构建基因表达的载体一般包括目的基因、启动子、标记基因和 ______ ，标记基因的作用是 ______。
（2）为了获得目的基因可以通过提取分析Con-Ins Gl毒蛋白中的 ______ 序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，再用DNA合成仪直接大量合成。基因工程中需要DNA连接酶，根据酶的来源不同分为 ______ 两类。
（3）将人工合成的目的基因导入大肠杆菌体内，一般先用药物处理大肠杆菌使之成为 ______ 细胞．再将重组DNA溶于 ______ 中与该类细胞融合，在一定温度下促进细胞吸收重组DNA分子完成转化过程。
（4）经过目的基因的检测和表达，获得的Con-Ins Gl毒蛋白活性未能达到期待的“速效胰岛素”的生物活性，导致这种差异的原因可能是 ______ 。
泡菜在发酵期间，由于乳酸菌的发酵作用，发酵产物乳酸不断积累，因此可以根据微生物的活动情况和乳酸积累量，将泡菜发酵过程分为三个阶段。
（1）发酵初期：蔬菜刚入坛时，其表面带入的微生物，主要是不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等。其中酵母菌的代谢类型为：__________________。最初酵母菌呼吸作用方式的反应方程式为__________________________________。发酵初期会有气泡从坛沿水槽内间歇性地放出，试说明原因：___________________________________________。
（2）发酵中期：由于初期乳酸发酵使乳酸不断积累，pH下降，厌氧状态形成。乳酸菌开始活跃，产生大量的乳酸，积累量可达到0.6% ~ 0.8%，pH为3.5 ~ 3.8。这一期间为泡菜完全成熟阶段，泡菜有酸味而且清香。此时坛内其它微生物的数量变化是_________（上升、稳定、下降），原因是：__________________________________。
（3）发酵后期：在此期间继续进行乳酸发酵，乳酸含量继续增加，可达1.0%以上。当乳酸含量达到1.2%以上时，发酵速度会逐渐变缓甚至停止，主要原因是____________________。此阶段泡菜酸度过高、风味已不协调。
据图回答
（1）生牛奶在饮用前一般要经过________处理，以保证人体健康。
（2）培养微生物时必须进行无菌操作，实验前所需的各种器材如培养皿等常用_______法灭菌。
（3）牛奶是微生物生长的良好培养基，为检测消毒前后牛奶中细菌含量的变化情况，做如图甲所做操作:用无菌吸管从锥形瓶中吸取1mL生牛奶稀释液至盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复2次后，得到的溶液稀释度为_________________。
（4）配制的培养基在接种之前需进行无菌检测，具体做法是_____________________。
（5）图丙中统计的菌落数比实际活菌数_______，原因是_______________________。
（6）从培养基的作用来看，图丁所示的培养基称为_______，能起到分离微生物作用的原因是:_______。
请回答下列有关微生物培养，应用和保存以及物质提取的问题：
（1）微生物培养过程常用的对涂布器进行灭菌的方法是_____________。培养酵母菌常用到的培养基是____（填名称）。
（2）从土壤中分离尿素分解菌的过程中，应向以尿素为唯一氮源的培养基中加入____________指示剂。
（3）对于需要临时保藏的菌种，首先要将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，等菌落长成后，再_________。对于需要长期保存的菌种，可以采用__________的方法。
（4）从橘皮中提取橘皮精油常用的方法是___________法，从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是_______法。
