Question

蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组目的基因常用的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落，可以通过颜色为依据直接筛选重组菌。用于筛选的菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码β-半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌β-半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个限制性酶切位点，便于插入目的基因。β-半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X-gal，使其变成蓝色物质。回答下列问题：

（1）玻璃和金属材质的实验器材利用__________方法灭菌。

（2）培养基灭菌后，需要冷却到____℃左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，原因是________________。

（3）为防止杂菌污染，培养基中要添加______。蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了_________。

（4）最终培养基出现的白色的菌落是（__）

A.目的基因和载体结合         B.只含目的基因          C.只含载体

（5）需要长期保存该菌种，可采用的方法是_______。

Answer

干热灭菌 50 防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 抗生素 X-gal A 甘油管藏法

【解析】

倒平板的温度一般50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固；
平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

（1）玻璃和金属材质的实验器材利用干热灭菌方法灭菌。

（2）培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，原因是防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。

（3）为防止杂菌污染，培养基中要添加抗生素。β-半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X-gal，使其变成蓝色物质，蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了X-gal。

（4）由于用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌β-半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，因此最终培养基出现的白色的菌落是目的基因和载体结合的菌落，故选A。

（5）需要长期保存该菌种，可采用的方法是甘油管藏法。